GenomONE® EX仙臺(tái)病毒包膜細(xì)胞融合試劑

GenomONE® EX仙臺(tái)病毒包膜細(xì)胞融合試劑
GenomONE®-CF EX含有仙臺(tái)病毒包膜和緩沖液，可促使細(xì)胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細(xì)胞。
僅僅需要30分鐘就可完成融合細(xì)胞及制造混合動(dòng)力的操作。

GenomONE^® EX仙臺(tái)病毒包膜細(xì)胞融合試劑

 

　　GenomONE^®-CF EX含有仙臺(tái)病毒包膜和緩沖液，可促使細(xì)胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細(xì)胞。僅僅需要30分鐘就可完成融合細(xì)胞及制造混合動(dòng)力的操作。

 

◆用途

●腫瘤疫苗·癌癥免疫研究

●癌細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞融合等

●再生醫(yī)療·細(xì)胞治療研究

●臟器來(lái)源細(xì)胞和干細(xì)胞融合等

●單克隆抗體的制備

●抗原B細(xì)胞和髓過(guò)氧化物酶細(xì)胞融合

●分生·分化·育種研究

●對(duì)脫核未受精卵的核移植（核置換）

●其他

●PEG&電融合的使用介紹

 

◆HVJ Envelope（HVJ-E）：

 

　　HVJ包膜是*滅活和純化仙臺(tái)病毒（HVJ*），即只留下細(xì)胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺(tái)病毒的HN蛋白可與細(xì)胞膜外的唾液酸受體結(jié)合，通過(guò)F蛋白的作用，引起細(xì)胞膜融合。在HVJ-E中，仙臺(tái)病毒的基因組RNA已經(jīng)*失活，在人類(lèi)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設(shè)備，它可以安全地在普通的實(shí)驗(yàn)室使用。

*HVJ：日本仙臺(tái)病毒

 

◆HVJ-E細(xì)胞融合原理

在低溫（0 - 8℃)條件下，每一個(gè)細(xì)胞與數(shù)百個(gè)以上的HVJ - E接觸，HVJ - E與細(xì)胞膜上的唾液酸受體結(jié)合，通過(guò)細(xì)胞表面吸附（步驟1），細(xì)胞通過(guò)HVJ-E相互連接（步驟2），形成細(xì)胞彼此聚集的狀態(tài)。當(dāng)該細(xì)胞/ HVJ-E的復(fù)合物加熱到37℃時(shí)，細(xì)胞膜干擾就會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大，細(xì)胞膜內(nèi)膜結(jié)構(gòu)也暫時(shí)改變。這種變化是短暫的，隨后會(huì)立即返回到正常結(jié)構(gòu)，但是在這個(gè)期間，細(xì)胞膜利用強(qiáng)疏水性結(jié)合力進(jìn)行相互融合（步驟3）。

 

步驟一	步驟二	步驟三

 

◆應(yīng)用方法

 

懸浮法	電鍍法

 

◆懸浮細(xì)胞融合案例

 

同種細(xì)胞融合

異種細(xì)胞融合

 

　　熒光標(biāo)記的紅（* 1）細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記（* 2）細(xì)胞（每1.0×10⁵個(gè)）在融合緩沖液50 μL混合后，加入HVJ-E冰敷5分鐘，隨后37℃下反應(yīng)15分鐘后，融合細(xì)胞（黃色）進(jìn)行了觀察。

 

◆黏著態(tài)和懸浮態(tài)細(xì)胞融合案例

 

在粘合狀態(tài)BHK-21（紅）和在浮動(dòng)狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

膠粘狀態(tài)的HeLa S3（紅）在浮動(dòng)狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

 

　　熒光標(biāo)記的（* 1）中的紅，附著的細(xì)胞在12孔平板，綠色熒光標(biāo)記（* 2）中，添加預(yù)先準(zhǔn)備的HVJ-E，來(lái)處理漂浮細(xì)胞1×10⁵個(gè)的懸浮液（融合緩沖污染），并在室溫下離心（1000轉(zhuǎn)），每個(gè)板5分鐘。隨后孵育37℃15分鐘后，更換增殖用的培養(yǎng)基繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)。觀察3個(gè)小時(shí)后的融合細(xì)胞（黃色）。

 

◆和PEG法的比較

 

　　紅色熒光標(biāo)志(* 1）的ratMSC（骨髓由來(lái)老鼠間葉系細(xì)胞）和綠色熒光標(biāo)識(shí)的老鼠原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞2×10⁵個(gè)融合緩沖液50　μL中混合后，添加HVJ – E，冰浴5分鐘，然后37℃孵育反應(yīng)15分鐘，觀察融合細(xì)胞（黃色）。1 - 2日培養(yǎng)后，觀察到粘著的融合細(xì)胞。在PEG法中融合緊接之后細(xì)胞毒性強(qiáng)烈，融合細(xì)胞的數(shù)量很少。

 

◆安全性說(shuō)明

HVJ-E失活的確認(rèn)（確認(rèn)無(wú)感染性病毒的存在）

 

1.	細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)（熒光灶單元（FFU）法） 處理LLC-MK2細(xì)胞，一到兩天后，病毒生長(zhǎng)性的HVJ融合蛋白F抗體通過(guò)熒光抗體法測(cè)定，已證實(shí)未檢測(cè)到病毒蛋白。<制造階段實(shí)驗(yàn)>
2.	受精卵生長(zhǎng)試驗(yàn)（血凝單位測(cè)定） 處理受精卵，3天后的病毒增殖，包括在HVJ表面的HN蛋白的紅血細(xì)胞聚合活性（HAU）測(cè)量作為指標(biāo)，已經(jīng)證實(shí)，沒(méi)有看到病毒的生長(zhǎng)。<制造階段實(shí)驗(yàn)>
3.	小鼠感染性研究 鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠（SIX周）在相同籠中飼養(yǎng)，通過(guò)測(cè)定血清中的抗HVJ抗體滴度進(jìn)行了個(gè)體之間感染性的檢測(cè)。其結(jié)果是，在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加，表明未感染HVJ-E。
4.	動(dòng)物個(gè)體的遺傳基因?qū)雽?shí)驗(yàn) 小鼠、大鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各種藥物實(shí)驗(yàn)（肺、氣管、肝和靜脈等）。已證實(shí)*沒(méi)有病毒感染或是可疑的事例。

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	產(chǎn)品規(guī)格
388-18721	GenomONE® -CF 細(xì)胞融合試劑套裝（1支套裝）	1 set
384-18723	GenomONE® -CF 細(xì)胞融合試劑套裝（4支套裝）	4 sets
382-18724	GenomONE® -CF 細(xì)胞融合試劑套裝（16支套裝）	16 sets

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