化學發(fā)光所需的抗體抗原

化學發(fā)光是免疫診斷當中，目前在臨床上應用最為廣泛，技術最為先進的技術手段之一，其主要利用抗原與抗體的免疫反應，在發(fā)光底物的激發(fā)下，發(fā)出光信號，達到對待測樣本進行定量或者半定量的檢測方法。其中抗原抗體是化學發(fā)光試劑最為核心，最為重要的原料，其質量直接影響試劑的質量。在進行化學發(fā)光試劑研發(fā)，如何選擇抗原抗體，其質量評價指標有哪些，本文帶你了解抗體的那些事兒。

什么是化學發(fā)光法？

“化學發(fā)光"一詞是由Eilhardt Weidemann（1888年）提出的?；瘜W發(fā)光，是指當外源性反應的振子興奮產(chǎn)物松弛到其基態(tài)并發(fā)射光子時所觀察到的現(xiàn)象，可以用簡單的術語來定義：發(fā)出光的化學反應?；瘜W反應產(chǎn)生足夠的能量（藍光發(fā)射約300 kJ/mol，紅光發(fā)射約150 kJ/mol），以誘導電子從其基態(tài)過渡到激發(fā)電子態(tài)。這種電子轉換往往伴隨著分子的振動和旋轉變化。

在有機分子中，最經(jīng)常遇到的是從π鍵軌道到π*反鍵軌道（π→π*）或從非鍵軌道到反鍵軌道（n→π*）的轉變。因此，電子返回基態(tài)并發(fā)射光子被稱為化學發(fā)光。被激發(fā)的分子也可以通過發(fā)生化學反應、碰撞失活、內部轉換或系統(tǒng)間交叉而失去能量。從分析的角度來看，這些輻射較少的過程是不可取的，因為它們與化學發(fā)光競爭（見下圖）。

當兩個分子發(fā)生化學反應，從而有能量釋放時（放熱反應），這種能量有時不是表現(xiàn)為熱，而是表現(xiàn)為光。這是因為能量激發(fā)了它所流入的產(chǎn)物分子。處于這種激發(fā)狀態(tài)的分子要么放松到基態(tài)，直接發(fā)光，要么將其能量轉移到第二個分子，后者成為發(fā)光體。這個過程被稱為化學發(fā)光（見下圖）。

A+B→AB*→產(chǎn)物+光

化學發(fā)光的原理

免疫反應?？乖M入機體，刺激機體的免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生免疫應答，這種反應叫免疫反應。免疫反應應答包括對抗原物質的感應、反應、效應三個連續(xù)的階段。

免疫分析（immunoassay，IA）。在臨床檢驗中，基于抗原與其配對抗體能夠發(fā)生特異反應，用已知的抗原或抗體檢測分析體液中的抗體或抗原性物質。

高特異性?？乖贵w的結合實質上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性?？乖贵w反應的高特異性是免疫學檢測的基礎。

高親和性。抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應式為：Ag+Ab→Ag·Ab。高親和力抗體的抗原結合點與抗原的決定簇在空間構型上非常適合，兩者結合牢固，不易解離。

化學發(fā)光中的抗原和抗體

在化學發(fā)光檢測試劑，抗原和抗體是最為核心的原料，抗原和抗體的質量直接影響成品試劑的質量，抗原抗體占據(jù)原料市場45%左右的市場。且在化學發(fā)光領域，由于檢測試劑與儀器是封閉系統(tǒng)，也就導致上游原料的抗原和抗體無法通用，不同的儀器對應的試劑所需要的抗原和抗體的指標要求也不盡相同。正常情況下，在抗體的質量評價中主要有以下的評價指標：

抗體親和力：

抗體與抗原表位或抗原決定簇之間的結合力稱為抗體親和力，體現(xiàn)了一個抗體分子和一個半抗原分子或抗原分子的一個決定簇起反應的能力。高親和力抗體診斷原料并不代表高性能試劑，針對不同種類的標志物，對于親和力的需求有一定差異。

線性范圍：

指分析方法在給定范圍內獲取與樣品中待測物濃度成正比的試驗結果的能力，是反映分析方法檢測范圍和準確性的直接指標。

特異性：

指抗體單一性識別某種特定抗原的能力。特異性雖然不直接影響試劑整體反應性，但是卻對于檢測結果有著很重要的影響。

純度：

在體外診斷試劑制備過程中，抗體標記效率與抗體的純度有關。通常與細胞培養(yǎng)工藝和抗體純化工藝所決定。

穩(wěn)定性：

是指在特定的儲存條件下，一定時間內抗體保持其活性的能力。在抗體修飾/偶聯(lián)前的穩(wěn)定性是抗體真實的穩(wěn)定性，修飾/偶聯(lián)后的抗體穩(wěn)定性主要取決于制備工藝。