化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
7-AAD Viability Staining Solution | 150T | GOY-F10198 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本品為7-AAD的即用型染色液，可直接用于細(xì)胞染色，其大激發(fā)波長(zhǎng)為546nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為647nm，可在流式細(xì)胞儀下(FL3通道)檢測(cè)熒光強(qiáng)度。若每次（含1×105個(gè)細(xì)胞）用量10μl，本品可供檢測(cè)150次。 7-Aminoactinomycin D，簡(jiǎn)稱7-AAD，是一種核酸染料，與DNA結(jié)合后可發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，其熒光特性與PI相似，可被488nm氬離子激光激發(fā)，但其發(fā)射光譜較PI窄，且發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng)，對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的佳替代品，可與多種488激發(fā)光激發(fā)的熒光染料聯(lián)合使用，如FITC，PE等。 另外，7-AAD是一種非滲透性熒光染料。該染料不能透過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜，但可穿透膜損傷細(xì)胞如晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜并與其內(nèi)的DNA結(jié)合，可用來(lái)區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞，廣泛用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。 注意事項(xiàng) 1）7-AAD為潛在致癌物質(zhì)，操作時(shí)請(qǐng)穿戴手套、眼罩以及其他防護(hù)措施，以避免接觸皮膚。 2）玻璃器皿上殘留的去垢劑也會(huì)影響染色的效果，導(dǎo)致細(xì)胞存在或不存在都會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)熒光。玻璃器皿的清洗應(yīng)用去垢劑，然后用自來(lái)水沖洗數(shù)遍后，用去離子水或蒸餾水漂洗。 3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 使用方法 【注】：7-AAD染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行，且僅僅染色死細(xì)胞。 樣品在完成其他染色后，取0.5ml細(xì)胞懸液（～1×105個(gè)細(xì)胞），加入約10μl 7-AAD細(xì)胞活力染色劑，根據(jù)其激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)（Ex/Em=545nm/650nm）在流式細(xì)胞儀下(FL3通道)檢測(cè)熒光強(qiáng)度。 儲(chǔ)存條件：4℃避光干燥 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
同型半胱酸（Hcy）測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法） 4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone 2549-87-3 中文名：4-丙烯氧基-2-羥基二苯甲酮 分子式：C16H14O3 度：99.0% 關(guān)鍵詞：
鐵蛋白 英文名稱： human Ferritin 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫(xiě)： Fe 4-Acetamidophenol 103-90-2 中文名：對(duì)乙酰氨基酚 分子式：C8H9NO2 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
鐵測(cè)試盒 Iron test case 4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide 119018-29-0 中文名： 分子式：C16H21N3O4S 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
調(diào)節(jié)活化蛋白 英文名稱： Human Raes 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫(xiě)： RAES 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 155405-80-4 中文名： 分子式：C16H16N4O3 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
甜菜堿含量測(cè)定試劑盒 可見(jiàn)分光光度法 50管/48樣 4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid di 106261-49-8 中文名：甲磺酸伊馬替尼 分子式：C13H20Cl2N2O2 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
120；7-氨基-4-甲基(AMC) 7-Amino-4-methylcoumarin 質(zhì)量規(guī)格：>97% 大鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA檢測(cè)試劑盒RatDesmin,DesELISAKit 96T/48T
Duvelisib (IPI-145) IPI-145 (INK1197) 質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的PI3K δ/γ抑制劑 人單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒 Human MCP-2 ELISA kit
5--4-氯-3吲哚神經(jīng)鈉鹽 X-NeuNAc 質(zhì)量規(guī)格：>98%,美國(guó)進(jìn)口 RatProgesteronereceptor,PROGRELISAKit小鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
ABEI；N-（4-氨丁基）-N-乙基異魯米諾 N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol 質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分 Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS)500毫升
TTAC；十四烷基三甲基氯化銨 Tetradecyltrimethylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR Mouseansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISA試劑盒小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
DTAC；十二烷基三甲基氯化銨 Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： TPO-Ab ELISA Kit
CTAC;十六烷基三甲基氯化銨 CTAC 質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA檢測(cè)試劑盒RatMyosinELISAKit 96T/48T
十八烷基三甲基氯化銨 Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒 Human MCP-1 ELISA kit
十烷基三甲基氯化銨 Decyltrimethylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99% RatProgesteronereceptor,PROGRELISAKit大鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
辛基三甲基氯化銨;八烷基三甲基氯化銨 Trimethyloctylammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS)不含NaHCO3500毫升
7-AAD細(xì)胞活力染色液細(xì)胞尿激酶（UROKINASE）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
?基質(zhì)金屬1抑制劑
0.2摩爾基質(zhì)金屬2/9抑制劑卡托普利（captopril）
基質(zhì)金屬3抑制劑（NNGH）
膠原酶潛酶活化劑（APMA）
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
化工儀器網(wǎng)