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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
鈣黃綠素Calcein-AM是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，發(fā)綠色熒光（Ex=490 nm，Em=515 nm）。 因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF-AM和CFDA）相比，由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低，是適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針，而且不會抑制任何的細(xì)胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。 由于死細(xì)胞缺乏酯酶，Calcein, AM僅用于對活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測試和短期標(biāo)記。作為核染色染料的碘化丙啶不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜，它穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā)：535 nm，發(fā)射：617 nm)，因此PI僅對死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn)，Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。由于不同細(xì)胞系的佳染色條件不同，我們建議個別確定 Calcein, AM 和 PI的合適濃度。 本品為粉末形式提供的Calcein-AM，純級別（≥95%），可與碘化丙啶（PI）（SY0491）聯(lián)合使用，用于活細(xì)胞和死細(xì)胞的同時檢測?；蛘咧苯淤徺I我司提供的Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒（SY0501）。 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Calcein, AM, Ultrapure Grade | 50μg|2×50μg|20×50μg|1mg | GOY-F10213 |
DNA提取流程圖：
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
生長激素 英文名稱： growth hormone 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： HGH Przewaquinone A 76843-23-7 中文名：紫丹參甲素 分子式：C19H18O4 度：98.0% 關(guān)鍵詞： 抗腫瘤; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
生長分化因子-3 英文名稱： growth differeiation factor 3 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： GDF-3 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 899822-97-0 中文名： 分子式：C17H25NO3 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
生長分化因子 -3(GDF-3) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 Nitrendipine 39562-70-4 中文名：尼群地平 分子式：C18H20N2O6
生長分化因子 -15(GDF-15) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 中文名： 分子式：C17H25NO3
生化檢測試劑盒 3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol 116539-55-0 中文名： 分子式：C8H13NOS 度：98.0%
L-苯甘甲酯鹽酸鹽 (s)-2-phenylglycine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：0.98 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA檢測試劑盒RatAquaporin2,AQP-2ELISAKit 96T/48T
D-丙乙酯鹽酸鹽 H-D-Ala-OEt·HCl 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR 人催乳素誘導(dǎo)蛋白(PIP)試劑盒 Human PIP ELISA Kit
利格列汀;利拉利汀 Linagliptin 質(zhì)量規(guī)格：>99%,二肽肽酶-4(DPP-4)抑制劑 RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-谷-α-芐酯 L-Glutamic Acid 1-Benzyl Ester 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR HIS標(biāo)記蛋白化試劑盒5
L-亮乙酯鹽酸鹽 H-Leu-OEt·HCl 質(zhì)量規(guī)格：>98% MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISA試劑盒小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-丙氨酰胺鹽酸鹽 L-Alanamine 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA試劑盒 ，英文名： MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit
L-組鹽酸鹽 L-Histidine monohydrate mono 質(zhì)量規(guī)格：>99%,一水 大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA檢測試劑盒RatAquaporin0,AQP-0ELISAKit 96T/48T
L-高精鹽酸鹽 L-Homoarginine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人催乳素抑制激素(PIH)試劑盒 Human PIH ELISA Kit
TPCK(進(jìn)分) TPCK 質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分,Sigma T4376 RaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAKit大鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
TPCK TPCK 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR HIS標(biāo)記蛋白擴(kuò)增試劑盒10
鈣黃綠素，超純級細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-7）活性比色法定量檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬（MMP-7）活性熒光定量檢測試劑盒
組織基質(zhì)金屬（MMP-7）活性熒光定量檢測試劑盒
細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-7）活性熒光定量檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬（MMP-3）活性比色法定量檢測試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
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