紅霉素N脫甲基酶（ERND）微量法測(cè)試盒 返回列表頁

商品介紹：
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的酶系，在外源物質(zhì)代謝中，尤其是藥物和毒物的代謝，具有重要作用。ERND在P450酶系中相當(dāng)于CYP2B亞型，與藥物代謝的去甲基化密切相關(guān)。CYP2B具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產(chǎn)物而具有解毒作用，也可使某些藥物經(jīng)CYP2B代謝活化。

測(cè)定原理：

ERND催化紅霉素釋放甲醛，通過Nash比色測(cè)定甲醛含量，即可計(jì)算出ERND活性。

自備儀器和用品：

普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和冰。

產(chǎn)品名稱：紅霉素N脫甲基酶（ERND）微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/48樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào)：GOY-01S6782
分類：P457系列

試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失，請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明！
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