鼠尾膠原蛋白Ⅰ型

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型

鼠尾膠原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen 的方法，通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷saun氫二鈉沉淀等步驟制備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型

慢病毒感染快速指南

1. 將目的細(xì)胞按 30%匯合度接種到 24 孔板，約 3-5×104細(xì)胞數(shù)/孔，不同細(xì)胞因為細(xì)胞大小不同細(xì)胞數(shù)量會不同，快速指南以細(xì)胞數(shù)量為 5×104為例，加入 500uL wan全培養(yǎng)基進行細(xì)胞培養(yǎng)。

2. 接種后 12-20h 感染陰性對照慢病毒（接種細(xì)胞至病毒感染細(xì)胞時間不宜太長，否則細(xì)胞增殖影響細(xì)胞密度不利用后期抗性篩選）。

3.加病毒量計算方法：（細(xì)胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量見下表。同時加入 Polybrene，每孔加 0.25uL，濃度為 10mg/mL Polybrene，細(xì)胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。

4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基，棄去培養(yǎng)基，每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。

5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。（注：如果 48h-96h 期間細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%，請及時傳代培養(yǎng)）。

6.建議將 48 孔板細(xì)胞進行傳代，傳代 12 孔板，后繼續(xù)觀察熒光，根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和熒光細(xì)胞比例綜合判斷細(xì)胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細(xì)胞生長良好，感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。（注：100%熒光感染不一定為細(xì)胞最佳 MOI 值，因為可能會造成細(xì)胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高，影響細(xì)胞狀態(tài)。