XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞

                
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞基因型：
Tet^rΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte[F´proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^r) Amy Cam^r]
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：
 XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率最高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫的超級感受態(tài)細(xì)胞。 XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；Tet^r， Cam^r賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性；lacI^qZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>2×10⁹cfu/μg。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

1.  XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.），迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞注意事項

1.  感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4. XL10-Gold菌株對 <40 µg/ml氯霉素有抗性，但對100 µg/ml氯霉素敏感。
5. XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)2×10⁹cfu/μg ；