貨號(hào): | CM-6011K |
供應(yīng)商: | 上海淳麥 |
數(shù)量: | 1000只 |
英文名: | Stbl2Chemically Competent Cell |
保質(zhì)期: | 1年 |
保存條件: | 零下80度 |
規(guī)格: | 20*100ul |
Stbl2感受態(tài)細(xì)胞
Stbl2 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品編碼: 保存條件: -80℃
產(chǎn)品規(guī)格:
Stbl2 | |
pUC19(control vector) | 10pg/μl 10μl |
Stbl2感受態(tài)細(xì)胞基因型:
F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB)
Stbl2感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明:
CMbio Stbl2菌株來源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段(正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等);mcr A 突變和mcr BC-hsdRMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1 和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。
CMbio Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109 cfu/μg DNA。
Stbl2感受態(tài)細(xì)胞操作說明:
- CMbio Stbl2感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基,使用其他培養(yǎng)基會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
4. 30℃,225 rpm復(fù)蘇90分鐘。
(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí), 30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘。)
5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.培養(yǎng)基上。
6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。 (若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過夜)
Stbl2感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng):
- 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
- 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
- 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。