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RNAi技術(shù)

對于基因調(diào)控和功能研究，abm提供了多種表達(dá)系統(tǒng)，用于：

 

siRNA：有效表達(dá)任何靶siRNA來敲除任何基因，而無需設(shè)計發(fā)夾環(huán)shRNA結(jié)構(gòu)，可在慢病毒，AAV和腺病毒中使用。

miRNA：使用我們現(xiàn)成的病毒載體和包裝好的病毒以及我們的檢測和定量工具，抑制或過表達(dá)任何miRNA，以研究哺乳動物系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。

UTR Reporters：使用我們的3'UTR或5'UTR平臺定量研究特定miRNA對靶基因的調(diào)控，這些平??臺均可作為針對任何人類，小鼠或大鼠基因的預(yù)制慢病毒載體和慢病毒的庫提供。

 

慢病毒siRNA文庫

來自abm的iLenti™RNAi表達(dá)系統(tǒng)允許通過轉(zhuǎn)染或慢病毒感染靶細(xì)胞來有效表達(dá)任何siRNA。該系統(tǒng)基于*的收斂啟動子設(shè)計，可實(shí)現(xiàn)更高的靶基因敲除效率，而無需單個啟動子載體中通常使用的發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)。abm提供了人類，小鼠和大鼠siRNA的全面文庫，可提供載體或預(yù)包裝的慢病毒格式

 

 

iLenti™siRNA的優(yōu)點(diǎn)：

 

慢病毒載體中的siRNA，用于轉(zhuǎn)染或病毒感染。

非常穩(wěn)定和高產(chǎn)的質(zhì)粒；不需要特殊的感受態(tài)細(xì)胞。

使用比傳統(tǒng)的19或21 bp寡核苷酸更有效的27-29 bp寡核苷酸。

聚合啟動子可避免發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)，使測序和質(zhì)粒生長更加容易。

GFP報告基因，用于監(jiān)測轉(zhuǎn)染或病毒感染。

所有構(gòu)建體均可以載體或病毒形式獲得，包括用于改善基因敲除的合并病毒。

 

siRNA集是否由帶有shRNA或siRNA的慢病毒載體組成？您是否驗(yàn)證RNA干擾？

我們的RNA干擾慢病毒載體包含siRNA。我們采用雙收斂啟動子系統(tǒng)，其中siRNA的有義和反義鏈由兩個不同的啟動子表達(dá)，而不是在發(fā)夾環(huán)中表達(dá)-以避免可能發(fā)生的任何重組事件。

 

如果您感興趣的基因沒有經(jīng)過驗(yàn)證和發(fā)布的siRNA序列，我們將使用siRNA設(shè)計軟件來定位合適的靶位點(diǎn)。如果這些設(shè)計的siRNA在您的實(shí)驗(yàn)中不能有效地降低基因表達(dá)，我們將提供一次替代（免費(fèi)），其中將包含一組新的序列供您嘗試。

 

Abm保證一組購買的四個siRNA Lentivector構(gòu)建物中少有一個在合適的靶細(xì)胞中具有超過70％的擊倒效率，顯示出> 80％的轉(zhuǎn)染效率。如果仍然認(rèn)為這四個構(gòu)建體無效，那么該基因很可能對siRNA敲低不敏感。

 

慢病毒miRNA表達(dá)

miRNA模擬物用于功能評估，并用作功能獲得研究的有用的外源工具。abm的表達(dá)miRNA的慢病毒可讓您的細(xì)胞系穩(wěn)定，長期表達(dá)miRNA。

 

為了滿足您的所有需求，我們提供同時表達(dá)初級miRNA和成熟miRNA的miRNA慢病毒。初級miRNA的表達(dá)意味著將表達(dá)miRNA周圍的整個區(qū)域，并且前體的兩個臂都將被加工，就像它是內(nèi)源的一樣。我們成熟的miRNA表達(dá)載體是專為高水平表達(dá)和加工成熟miRNA而設(shè)計的。

 

 

主要特征

 

我們提供了來自人類，小鼠和大鼠的6500多個成熟和主要miRNA的集合。

慢病毒遞送，用于將遺傳物質(zhì)整合到宿主細(xì)胞中，引起穩(wěn)定的長期基因表達(dá)。

慢病毒具有廣泛的宿主范圍，可以感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，從而可以將基因傳遞給多種細(xì)胞類型。

 

產(chǎn)品信息

miRNA結(jié)合

工作流程

我們提供合成，載體或病毒形式的miRNA過表達(dá)/模擬產(chǎn)物和miRNA抑制劑，以適合您的實(shí)驗(yàn)。

pLenti-III-mir-GFP，pLenti-III-mir，pLenti-III-mico-GFP，pLenti-III-mico矢量圖

載體圖

我們的miRNA過表達(dá)產(chǎn)品可提供或不提供GFP，并可提供過早的miRNA插入片段或成熟的5p和3p miRNA插入片段。

 

什么是Sanger miRBase序列數(shù)據(jù)庫？

miRBase是由Sanger研究所建立的序列數(shù)據(jù)庫。microRNA Registry中的每個條目均代表microRNA轉(zhuǎn)錄本的預(yù)測發(fā)夾部分（在數(shù)據(jù)庫中稱為mir），其中包含有關(guān)成熟microRNA序列（稱為miR）的位置和序列的信息。該數(shù)據(jù)庫在結(jié)果發(fā)布之前為microRNA基因獵人提供了新穎的microRNA基因的唯yi名稱，并為已發(fā)布的microRNA提供了可搜索的數(shù)據(jù)庫。

 

       pLenti-III-miR-Off系統(tǒng)或LentimiRa系統(tǒng)使用空白載體進(jìn)行對照，但我通常使用加擾對照進(jìn)行si-RNA實(shí)驗(yàn)。是否支持使用未加擾的miRNA實(shí)驗(yàn)空白對照？

加擾和空白對照都是有效的陰性對照。但是，在使用加擾序列時，脫靶效應(yīng)存在爭議。通過使用空白載體作為陰性對照，可以消除脫靶效應(yīng)。如果您的實(shí)驗(yàn)需要對空白控件進(jìn)行加擾的控件，我們也可以根據(jù)要求為您定制。

pre-miRNA和GFP是否都在同一CMV啟動子下？如果是，那么兩者之間是否存在翻譯切割位點(diǎn)？

是的，pre-miRNA和GFP都在同一CMV啟動子下。

 

兩者之間沒有翻譯切割位點(diǎn)。

 

轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)在pre-miRNA之后，因此GFP和pre-miRNA一起轉(zhuǎn)錄，因此使GFP成為miRNA的實(shí)際轉(zhuǎn)錄報告基因。mRNA的pre-miRNA區(qū)域自身折疊并形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，該莖環(huán)結(jié)構(gòu)將在細(xì)胞中被Drosha / Pasha酶處理，并從mRNA的GFP部分切割下來。

 

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