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產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	品牌
11422-1-AP	Marcksl Antibody	Proteintech
10934-1-ap	Cyclin D2 Antibody	proteintech
10586-1-AP	STMN2 Antibody	proteintech

MARCKSL1抗體1出版物

兔多克隆| 貨號：11422-1-AP

物種特異性：人類，老鼠

在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織

在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織，人胰腺癌組織

 

注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進行抗原回收；（*）或者，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復(fù)

推薦稀釋度：

白平衡：1：500-1：1000

IHC：1：20-1：200

取決于樣品，在“驗證”選項卡中檢查數(shù)據(jù)

產(chǎn)品信息：

資源：兔子

純化方法：抗原親和純化

同型：IgG抗體

存儲：具有0.1％疊氮化na和50％甘油pH 7.3的PBS。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存。

免疫原信息：

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名：類馬克1

計算分子量：195aa，20 kDa

觀察分子量：48 kDa的

GenBank登錄號：BC007904

基因編號（NCBI）：65108

基因符號MARCKSL1

同義字F52，Mac MARCKS，MACMARCKS，MARCKS like 1，MARCKS like protein 1，MARCKS related protein，MARCKSL1，MLP，MLP1，MRP

背景 ：

MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經(jīng)組織中廣泛表達，也稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關(guān)蛋白（MRP），屬于MARCKS家族，它是PKC的高酸性豆蔻?；易宓孜飶V泛分布在包括巨噬細胞在內(nèi)的各種細胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質(zhì)的計算分子量為20 kDa，表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導(dǎo)致神經(jīng)管閉合缺陷，依賴于肌動蛋白功能，細胞形狀和細胞遷移的協(xié)調(diào)控制的事件。人們認為MARCKSL1調(diào)節(jié)肌動蛋白的細胞骨架，從而參與主要的細胞反應(yīng)，例如吞噬作用，分泌，運動，有絲分裂和膜運輸。

 

免疫印跡和免疫沉淀方案：

細胞裂解液的制備：

將RIPA緩沖液添加到細胞中（100μL放入35 mm皿中，200μL放入60 mm皿中，500μL加入100毫米培養(yǎng)皿），同時將培養(yǎng)皿置于冰上。刮擦細胞并輕輕搖動懸吊在冷藏室中的搖桿或定軌振動器上15分鐘裂解細胞。用浴超聲儀在冰水中超聲處理，直樣品不再粘稠。在4℃下以12000 g的速度離心細胞5分鐘以去除沉淀。移動上清液換一個新鮮的管。細胞裂解物的終濃度將為2-3μg/μL。對于白平衡，添加4×SDS檔緩沖裂解液1×SDS終濃度。

免疫印跡：

1.煮沸10分鐘后，將20-50μL樣品上樣SDS PAGE。對于大多數(shù)蛋白質(zhì)，建議每泳道上樣量使用30-80μg總裂解物蛋白質(zhì)，因為細胞中80％的蛋白質(zhì)種類的濃度非常低。

2.將凝膠浸入蛋白質(zhì)印跡轉(zhuǎn)移緩沖液中。大多數(shù)情況下建議使用PVDF膜蛋白質(zhì)。將膜浸入甲醇中1-2分鐘，然后將膜浸入轉(zhuǎn)移緩沖液10分鐘，然后將其放在厚厚的緩沖液濾紙疊上。然后用另一疊浸有緩沖液的濾紙覆蓋它。掩蓋轉(zhuǎn)移儀器。凝膠應(yīng)在膜的負極。

3.以1 mA / cm2的電流運行90分鐘。

4.將膜在封閉緩沖液中于室溫下孵育1小時或過夜在4℃。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

5.用封閉緩沖液稀釋一抗。在37℃下孵育膜1.5小時室內(nèi)溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

6.用封閉緩沖液稀釋二抗。在37℃下孵育膜1小時室內(nèi)溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘。

7.用洗滌緩沖液洗滌膜3×10分鐘。

8.用ECL顯色。

免疫沉淀：

1.將200-350μL細胞裂解液（包含1-3 mg總蛋白）轉(zhuǎn)移到微量離心管中。

2.向細胞（或預(yù)先清除的）裂解物中添加150-300μL孵育緩沖液和1-4μg一抗。jia抗體濃度應(yīng)通過滴定確定。用對照IgG建立陰性對照實驗（對應(yīng)于原發(fā)性抗體來源）。輕輕搖動在4℃下孵育2-4小時或過夜。

3.加入50μLProtein A或G Sepharose微珠漿液以捕獲免疫復(fù)合物。將混合物在4℃輕輕搖動1-4小時。

4.取下端蓋，從旋轉(zhuǎn)柱底部釋放上清液。必要時，重懸磁珠混合物以提高流速。

5.用含1x蛋白酶抑制劑的1x TBST將珠子洗滌5次。后之后洗滌，將旋轉(zhuǎn)柱在4℃下于500 g離心30秒，然后收集上清液并丟棄。

6.將離心柱放在新的微量離心管中，合并洗脫液。洗脫沉淀用40μl洗脫緩沖液在4℃下于8000-10000g離心1分鐘，重復(fù)一次用新的40μl洗脫緩沖液洗脫。

7.在洗脫液中加入10μl堿中和緩沖液和30μl4×樣品緩沖液，在95-100℃5分鐘。將其保存在-20℃或在SDS-PAGE上加載20-40μl，并通過WB。

組織培養(yǎng)細胞免疫熒光的協(xié)議：

1.在小的圓形玻璃蓋上培養(yǎng)細胞。

2.用4％PFA或有機溶劑在4℃固定細胞20分鐘（如果您使用固定的有機溶劑，則只需跳過第3步，然后直接進行第4步）。

3.將玻璃杯準確轉(zhuǎn)移5分鐘0.2％Ttiton X-100-PBS中。

4.在室溫下用BSA-PBS封閉細胞1h，或在4℃下過夜。

5.在蓋玻片上加入50μL特異性一抗，并在室溫下孵育1小時在潮濕的容器中加熱溫度。用PBS清洗蓋板三遍。

6.在每個蓋玻片上加入50μL熒光標記的第二抗體，并在黑暗中于潮濕的容器中于室溫下孵育1小時。

7.將蓋玻片安裝在15％的甘油中或少量載玻片上。

8.用指甲油在邊緣上密封蓋玻片。

石蠟包埋的組織切片的免疫組織化學(xué)方案：

1.在2種二甲苯中對載玻片進行脫蠟處理，一次40分鐘，另一次20分鐘。

2.將玻片轉(zhuǎn)移到100％酒精，95％酒精，80％酒精，60％酒精和ddH2O中每次5分鐘。

3.將載玻片放在裝有抗原回收緩沖液的容器中，并在中間放置微波以進行操作。幾分鐘（700 W烤箱），讓回收溶液在室溫下冷卻。

4.用TBS沖洗2×5分鐘。

5.通過在3％H2O2溶液中孵育切片來阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性ddH2O 10分鐘。

6.用TBS沖洗2×5分鐘。

7.在室溫下在TBS中封閉5-10％的山羊血清30分鐘。

8.排干幻燈片幾秒鐘（請勿沖洗）并擦拭圓形部分。

9.應(yīng)用在TBS中組成的一抗。在室溫或4℃下孵育1小時過夜。

10.用TBST沖洗2×5分鐘。

11.在室溫下應(yīng)用Envision二抗30分鐘。

12.用TBS沖洗2×5分鐘。

13.在室溫下用發(fā)色團（DAB）顯影，在顯微鏡下觀察。

14.用自來水沖洗5分鐘。

15.在市長的蘇木浴中復(fù)染30-60秒。

16.在水浴中洗7-8次，然后自來水3分鐘。

17.用60％，80％，95％和100％的酒精分別脫水5分鐘。

18.轉(zhuǎn)移到二甲苯中5分鐘。通風30分鐘。

19.安裝

 

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