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Encorbio計(jì)算要稱(chēng)出多少硫酸銨才能制成特定飽和度的溶液

硫酸銨計(jì)算器：

 

硫酸銨沉淀是分離蛋白質(zhì)的一種簡(jiǎn)單而有效的方法。它基于這樣一個(gè)事實(shí)：在高鹽濃度下，蛋白質(zhì)不聚集的自然趨勢(shì)被克服，因?yàn)楸砻骐姾杀恢泻?。電荷中和意味著蛋白質(zhì)會(huì)傾向于結(jié)合在一起，形成大的復(fù)合物，因此很容易通過(guò)溫和的離心沉淀出來(lái)。由于每種蛋白質(zhì)都會(huì)在特定的鹽濃度下開(kāi)始聚集，因此這種方法提供了一種在混合物中富集特定蛋白質(zhì)的簡(jiǎn)單方法，例如用于從血清中分離免疫球蛋白。通過(guò)簡(jiǎn)單地加入等體積的飽和硫酸銨，很容易使制劑達(dá)到 50% 的飽和度。制作具有更高飽和度百分比的溶液是一個(gè)更大的問(wèn)題，因?yàn)槟赡鼙仨毺砑臃浅４罅康娘柡土蛩徜@。向樣品中添加固體硫酸銨通常更容易，但計(jì)算添加量相當(dāng)耗時(shí)。下面的程序計(jì)算您需要向特定體積的溶液中添加多少固體硫酸銨才能在特定溫度下獲得特定百分比飽和度；

以毫升為單位輸入溶液的起始體積：      

所需的飽和百分比硫酸銨：      

輸入硫酸銨的起始飽和百分比：      

          

 

硫酸銨沉淀方案：您可以將蛋白質(zhì)制劑與 100% 硫酸銨溶液混合，或者您可以使用上述程序添加固體硫酸銨以達(dá)到所需的百分比濃度。典型的方案如下：

 

1. 制備飽和硫酸銨溶液，例如約 550g 配制成 1L 蒸餾水。輕輕加熱以溶解所有硫酸銨，并在磁力攪拌器上冷卻至工作溫度。應(yīng)形成硫酸銨晶體，并告訴您溶液已*飽和。

2. 向樣品中加入適當(dāng)體積的飽和硫酸銨或固體硫酸銨以獲得所需濃度。攪拌 1 小時(shí)以*平衡。

3. 以 10,000g 離心 15 分鐘以沉淀蛋白質(zhì)。

4. 加入更多的飽和硫酸銨或固體硫酸銨進(jìn)行下一次濃縮，重復(fù)攪拌和離心。

5. 將沉淀溶解在 PBS 中以分析蛋白質(zhì)。根據(jù)您的下一步計(jì)劃，可能需要透析硫酸銨。

程序是如何工作的： 硫酸銨是在這樣的飽和硫酸銨極易溶于水是在25 4.1M溶液Ô C，4.06M在20 Ô C，3.97M在10 Ô C，3.93M在4 ö C和3.9M在0 o C. 硫酸銨 (NH 4 ) 2 SO 4的分子式和分子量為 132.14，因此飽和發(fā)生在 25 o C 時(shí)為 541.8 g/L，20 o C時(shí)為 536.49 g/L ，524.6 g/L L 在 10 o C，519.1 g/L 在 4 o C 和 515.35 g/L 在 0 oC、硫酸銨的比容也與溫度有關(guān)，但約為0.54ml/g，也就是說(shuō)在水溶液中加入1g硫酸銨，體積會(huì)增加0.54ml左右。所以如果你加入的量你需要在 25 o飽和 1L 的水C 到 1L 水，也就是 541.8 克硫酸銨，你不會(huì)得到飽和溶液。1L 水加 541.8g 硫酸銨得到 1L 加 541.8 * 0.54 mls，等于 1,293 mls 最終體積，因此溶液將 1,000/1,293 * 100% 飽和，約為 77%。例如，如果您想通過(guò)添加固體硫酸銨來(lái)制備 25% 至 50% 的溶液，該計(jì)算也并不像您想象的那么簡(jiǎn)單——因?yàn)榱蛩徜@提供了如此多的額外體積，您需要更多的固體銨硫酸鹽將溶液從 25% 飽和度提高到 50% 飽和度，而不是將其從 0% 提高到 25% 飽和度所需的飽和度。因此，大多數(shù)人使用表格或列線圖來(lái)計(jì)算要添加多少硫酸銨。您可以在許多地方找到表格來(lái)執(zhí)行此操作（例如，請(qǐng)參閱Englard 和 Seifter在 Methods in Enzymology 第 182 卷，1990 年出版，另見(jiàn) Scopes，RK“Protein Purification:Principles and Practice”，Springer-Verlag New York，1994）?；蛘吣梢允褂梦覀?的（據(jù)我們所知）在線程序，它可以方便地為您計(jì)算所需的金額。這些表格可以很好地獲得您需要添加到 1 升或 100 毫升溶液中的數(shù)量，然后您通常必須從那里計(jì)算您實(shí)際擁有的體積。我們的程序還會(huì)考慮您正在使用的體積，從而節(jié)省您的進(jìn)一步計(jì)算，以便您可以直接進(jìn)行平衡。我們的程序使用等式；

G = Sat(M 2 -M 1 )/(SatM-(SpecVol/1000*132.14*SatM*M 2 ))

 

其中 G = 要添加的硫酸銨的重量，以克/升為單位，Sat 是硫酸銨飽和溶液中的克數(shù)/升，M 2 = 要達(dá)到的摩爾濃度，M 1 = 起始摩爾濃度，SatM是硫酸銨飽和溶液的摩爾濃度。SpecVol是硫酸銨的比容，即1g加入水溶液的體積量，約為0.54mls。Sat、SatM 和 SpecVol 都隨溫度變化，程序會(huì)考慮在內(nèi)。數(shù)字 132.14 是硫酸銨的分子量。所使用的方程和各種因子基于Coligan 等人編輯，John Wiley (1998) 編輯的“當(dāng)前蛋白質(zhì)科學(xué)協(xié)議”的第 A.3F.1 節(jié)增補(bǔ) 13 中發(fā)表的那些。

 

這個(gè)程序和上面列出的不同出版物可能給出的結(jié)果略有不同，那么誰(shuí)是對(duì)的？不同的計(jì)算給出不同結(jié)果的原因有很多，所以最好堅(jiān)持一個(gè)你知道有效的表格或協(xié)議，因?yàn)槟闶欠裾娴挠?span> 50% 或 50.8% 的飽和硫酸銨并不是那么重要，只要您可以重復(fù)地進(jìn)行適合您正在做的任何事情的任何濃度。

 

 

免責(zé)聲明：該程序的構(gòu)建主要是為了為世界各地忙碌的研究人員節(jié)省時(shí)間。我們希望您覺(jué)得它有用，并且我們相信它是準(zhǔn)確可靠的。但是，對(duì)于因使用該程序而可能出現(xiàn)的任何問(wèn)題，我們概不負(fù)責(zé)。

 

小鼠髓鞘堿性蛋白單克隆抗體

Cat# MCA-7G7

  髓鞘堿性蛋白 (MBP) 是神經(jīng)系統(tǒng)中圍繞軸突的髓鞘的主要蛋白質(zhì)之一。由于它具有相對(duì)較低的分子量和高豐度，因此蛋白質(zhì)序列是在 30 多年前從純化的蛋白質(zhì)中確定的 (1)。這種蛋白質(zhì)是由中樞和神經(jīng)系統(tǒng)中的少突膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的，因此 MBP 的抗體是這種細(xì)胞類(lèi)型的良好標(biāo)志物。在外周神經(jīng)系統(tǒng)中，MBP 由髓鞘化雪旺氏細(xì)胞表達(dá)，因此該抗體可用于識(shí)別培養(yǎng)物或切片材料中的這些細(xì)胞。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，四種不同形式的蛋白質(zhì)由單個(gè)基因的交替轉(zhuǎn)錄制成，蛋白質(zhì)產(chǎn)物在人類(lèi)中的分子量分別為 21.5、20.5、18.5 和 17.2kDa。嚙齒動(dòng)物的單個(gè)基因也產(chǎn)生 4 種不同的蛋白質(zhì)，但剪接機(jī)制不同，產(chǎn)生四種形式，大小略有不同，21.5、18.5、17 和 14kDa。一些興趣集中在 MBP 作為涉及多發(fā)性硬化癥小鼠模型 (MS, 3) 和人類(lèi)患者 (4) 的潛在重要自身抗原。釋放到血液和腦脊液中的 MBP 的檢測(cè)具有作為 MS 脫髓鞘和軸突損失以及其他相關(guān)損傷和疾病狀態(tài)（例如 5）的替代生物標(biāo)志物的一些潛力。

      MCA-7G7 抗體是針對(duì)從牛腦中生化純化的 MBP 制劑制備的。它可用于識(shí)別神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)物中的少突膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺氏細(xì)胞，在切片材料中顯示髓鞘和髓鞘細(xì)胞，并探測(cè)蛋白質(zhì)印跡以尋找 MBP 基因產(chǎn)物。該抗體對(duì)醛固定也相當(dāng)不敏感，因此可用于石蠟切片的免疫組織化學(xué)。MCA-7G7 抗體結(jié)合所有四種 CNS MBP 同種型，因此抗體的表位位于所有四種基因產(chǎn)物共享的“核心”中。進(jìn)一步作圖將表位定位到肽 TPPPSQGKG，人類(lèi) 21.5kDa 序列的氨基酸 125-133。數(shù)據(jù)是用重疊肽產(chǎn)生的，這表明最后四個(gè)氨基酸 SQGKG 可能是表位的關(guān)鍵元素。該肽在大鼠、小鼠、牛和許多其他物種中具有不變性，因此該抗體將具有廣泛的適用性。相比之下，我們的替代小鼠單克隆MCA-7D2僅結(jié)合 21.5kDa 和 18.5kDa 大鼠 MBP 同種型，但結(jié)合所有牛和人同種型，將表位映射到 AEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLG，人類(lèi) 21.5kDa 序列的氨基酸 145-184。人類(lèi)和大鼠中四種 CNS MBP 同種型的序列比對(duì)可從此處下載。鼠標(biāo)選擇左側(cè)的圖像以獲得更大的視圖，并在“附加信息”選項(xiàng)卡上選擇更多信息。

 

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