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介紹

 

沙門氏菌致突變性檢測試劑盒中包含的材料幾乎包括所有如Maron所述，進(jìn)行“艾姆斯分析"所需的供應(yīng)

&Ames（Maron，D.M.和B.N.Ames，沙門氏菌改良方法）突變試驗，突變研究，113:173-2151983）和Mortelmans&Zeiger（Mortelmans，K.和E.Zeiger，艾姆斯沙門氏菌/微粒體致突變性分析，突變研究，455:29-602000）。本手冊簡要概述了測試的重要方面-我們強(qiáng)烈建議您仔細(xì)閱讀其中一個在您嘗試執(zhí)行以下操作之前，請參閱這些文件和OECD指南471化驗MOLTOX®的所有元件該套件采用最高標(biāo)準(zhǔn)配方和制造質(zhì)量和部件符合Maron&Ames的建議（同上）。提供的某些材料（如STD）™ 冷凍干燥（S9）已經(jīng)過測試由我們的實驗室專門開發(fā)用于包含在分析試劑盒中。大部分工具包中包含的材料附有GLP級質(zhì)量控制和配方說明-您可以放心，每個藥盒的每個元素都已在分析中*測試性能。

 

MOLTOX®

 

沙門氏菌致突變性檢測試劑盒供個人使用  精通微生物學(xué)的科學(xué)和藝術(shù)；使用嚴(yán)格的無菌技術(shù)是必要的

 

對于成功應(yīng)用工具包中包含的材料至關(guān)重要。而試劑盒中包括的細(xì)菌菌株（鼠傷寒沙門菌菌株TA1535、TA1537、TA98和TA100）是減毒的，它們具有潛在的致病性，必須加以處理  照著如果你對菌株的安全處理有任何疑問在您咨詢我們之前，請不要繼續(xù)使用本工具包中包含的內(nèi)容或已獲得熟練生物化學(xué)家的建議；或微生物學(xué)家。

 

“Ames分析"的性能包括幾個不同的實驗步驟；例如。，試驗設(shè)計；S9混合配方；加藥和電鍍；表型確認(rèn)；目標(biāo)細(xì)胞效價測定；閱讀（計數(shù)）和分析。中包含的材料選擇工具包是為了在以下方面為用戶提供相當(dāng)大的靈活性：測試設(shè)計。本手冊旨在幫助使用工具包內(nèi)容；本手冊中提供的信息旨在補(bǔ)充馬龍和艾姆斯，摩特勒曼和澤格爾的報紙。本手冊中包含的說明雖然以逐步的方式呈現(xiàn)，但可以修改-如果您希望在分析的任何階段獲得幫助，請聯(lián)系我們的客戶服務(wù)，我們將很高興與您合作，幫助解決任何可能出現(xiàn)的問題。

 

化驗

 

MOLTOX®

 

試劑盒包含四種測試菌株：TA1535、TA1537、TA98和TA100在組氨酸操縱子中構(gòu)建具有不同損傷的菌株（見表1，莫特爾曼和澤格爾）。這種突變使它們不能合成組氨酸，即。它們是需要外源性組氨酸的組氨酸營養(yǎng)缺陷型。另外，TA1535，TA1537，TA98和TA100改變了細(xì)胞壁（rfa），增加了細(xì)胞對某些物質(zhì)的滲透性高分子量材料。這些菌株在DNA修復(fù)編碼中也有一個損傷導(dǎo)致對各種誘變劑敏感性增加的基因（uvrB）。從此病變延伸至生物素合成基因（bio），生物素也是生長所必需的]。測試菌株TA98和TA100攜帶一個質(zhì)粒（pKM101），其作用是增加易出錯的DNA修復(fù)系統(tǒng)的活性和對抗生素的耐藥性 氨芐西林、測試菌株TA1535和TA1537不含質(zhì)粒。由于測試菌株的特性，“Ames分析法"特別適用于誘變活性檢測。幾種測試菌株對DNA成像化學(xué)誘變劑的反應(yīng)不同，因此通常組合使用。每個由于特定的環(huán)境因素，該菌株傾向于對特定類別的致突變化學(xué)物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng) 組氨酸操縱子損傷。然而，暴露于誘變劑可能導(dǎo)致遺傳變異組氨酸操縱子的逆轉(zhuǎn)導(dǎo)致野生型表型的恢復(fù)；突變體的組氨酸操縱子功能“恢復(fù)"，并能合成組氨酸。分析取決于區(qū)分組氨酸營養(yǎng)缺陷型（測試員）的能力菌株）和組氨酸原營養(yǎng)體（突變體）。相應(yīng)地，目標(biāo)細(xì)胞被鍍在表面上含有微量組氨酸的培養(yǎng)基，可進(jìn)行幾輪細(xì)胞分裂必須“修復(fù)"突變事件；組氨酸迅速耗盡，導(dǎo)致細(xì)胞停止生長非突變細(xì)胞的生長。如果存在致突變化學(xué)物質(zhì)，（相對）罕見改變的組氨酸操縱子可能發(fā)生逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致生長的繼續(xù)微量組氨酸耗盡后。出現(xiàn)在組氨酸限制酶上的回復(fù)突變菌落培養(yǎng)皿代表原生動物，它們要么是自發(fā)產(chǎn)生的，要么是由于細(xì)菌的作用誘變劑。

 

以下章節(jié)描述了進(jìn)行基本四種應(yīng)變的程序

 

化驗大多數(shù)情況下，所述方法直接取自Maron&Ames（同上）以及后來的Mortelmans&Zeiger。如果您之前沒有使用分析，我們建議您嚴(yán)格遵守這些說明；有經(jīng)驗的方法將查找有關(guān)STDiscs使用的有用信息™, 四元計算機(jī)™ 盤子，和凍干S9。

 

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