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RNA

mRNA定制合成服務

高得率，高性價比

APExBIO 提供高得率和高性價比的 mRNA 和長鏈RNA（多個堿基）的定制合成。在微克到毫克的級別上，開展廣泛的mRNA修飾服務。mRNA 可從客戶提供的 DNA 模板生成；或者我們可以從零開始， 提供完整的mRNA體外合成。我們?yōu)樗械臉藴?span> mRNA 片段進行 mCAP、ARCA 和 EZ Cap加帽或修飾核苷酸的處理。

有關訂購和更多信息，請下載我們的客戶mRNA定制合成問卷 (Custom mRNA Synthesis Questionnaire.PDF) 并通過電子郵件。我們將很快給您答復并提供報價。

Modified Nucleotide-containing mRNA Synthesis

mRNA體外轉錄合成（IVT, in vitro transcription）

為了mRNA能最終有效地在體外翻譯， 需要在體外轉錄合成mRNA時，摻入5’端的m7G加帽結構和3’端的多聚腺苷酸[poly(A)尾]結構。加帽的過程，是通過T7 RNA 聚合酶共轉錄，在mRNA分子5’端摻入諸如ARCA (Anti-Reverse Cap Analog)。 加尾的過程，是用Poly(A)聚合酶在mRNA分子3’端，加上poly(A)尾， 再用DNase酶消化DNA模板。5-甲基-胞苷(5-Methyl-CTP), 假尿苷(Pseudo/ ψ-UTP)和其他修飾核苷酸也可摻入mRNA, 來降低免疫原性和加強穩(wěn)定性。合成后的mRNA適用于細胞轉染、微注射、體外翻譯和RNA疫苗等。

定制合成 的mRNA 擁有廣泛的應用：

    --用于基因組編輯的mRNA，比如Zinc-finger Nuclease mRNA，TALEN mRNA，Cas9 mRNA和Recombinase mRNA等。

    --報告基因的mRNA，比如EGFP mRNA和 Luc mRNA, 用于熒光顯微鏡、流細胞測量和生物發(fā)光成像等。

    --重組mRNA, 用于non-integrating generation of iPSC。

產(chǎn)品驗證:

相關產(chǎn)品

貨號      產(chǎn)品名稱      貨號      產(chǎn)品名稱

B8175    ARCA     B8174    mCAP

B7972    Pseudo-UTP  B7967    5-Methyl-CTP

B8061    5-Methoxy-UTP   K1046    RNase Inhibitor, Murine

K1047    HyperScribe™ T7 High Yield RNA Synthesis Kit       K1053    HyperScribe™ Poly (A) Tailing Kit

K1060    HyperScribe™ T7 High Yield Fluorescein RNA Labeling Kit    K1061        HyperScribe™ T7 High Yield Cy3 RNA Labeling Kit

K1062    HyperScribe™ T7 High Yield Cy5 RNA Labeling Kit  K1063    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit (ARCA, T7, poly(A))

K1064    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit Plus 1 (ARCA, 5mCTP, ψUTP, T7, poly(A))  K1065    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit Plus 2 (ARCA, 5-moUTP, T7, poly(A))

K1066    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit II (EZ Cap Reagent AG (3' OMe), T7, poly(A))   K1067    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit II Plus 1 (EZ Cap Reagent AG (3' OMe), 5mCTP, ψUTP, T7, poly(A))

K1068    HyperScribe™ All in One mRNA Synthesis Kit II Plus 2 (EZ Cap Reagent AG (3' OMe), 5-moUTP, T7, poly(A))     B8176    EZ Cap™ Reagent AG

B8178    EZ Cap™ Reagent AG (3' OMe)

 

mRNA純化:

由T7 RNA聚合酶在體外轉錄合成的mRNA，可能含有各種污染物：比如未反應*的小分子底物、反應所需的蛋白酶，以及反應中產(chǎn)生的非特異性產(chǎn)物，如過短或過長或未*加帽的mRNA等。 某些RNA序列甚至會誘導高水平的免疫原性。

APExBIO提供高效的純化技術，可去除相關污染物，從而提高下游應用的處理效率。

硅膠膜純化柱（Silica-gel Membrane Spin Column）

它是一種用于快速核酸純化的固相萃取技術。mRNA可以在特定條件下，結合到硅凝膠膜的固相，并在水中或TE (pH 7)中進行后續(xù)洗滌和洗脫步驟。這種方法清除了大多數(shù)蛋白質(zhì)、DNA和NTPs。

HPLC純化法（?KTA avant系統(tǒng)）：

mRNA的純化，可以通過?KTA avant系統(tǒng)，使用alkylated non-porous polystyrene-divinylbenzene copolymer microspheres和優(yōu)化的緩沖體系，然后進行mRNA分析和mRNA分離。

HPLC 純化法可以從體外合成和化學修飾后的mRNA 中，去除雙鏈DNA和其他污染物，使 mRNA 具有更高水平的翻譯，減少免疫原性或 RNA sensor激活。

我們所有的 mRNA 產(chǎn)品都提供：

 

    -將mCAP/ARCA/EZ Cap摻入到轉錄合成的mRNA片段中，以提高翻譯效率。

    -通過加入經(jīng)過修飾的核苷酸（5mCTP, ψUTP）和poly（A）尾，減少宿主細胞免疫反應并增強穩(wěn)定性。

    -在合成mRNA過程中，加入DNase酶，降解DNA模板。

    -用磷酸酶去除RNA末端的5'三磷酸鹽(5’ triphosphates)，進一步減少哺乳動物細胞的先天免疫反應。

    -采用強大的純化系統(tǒng)，提供高產(chǎn)量的 mRNA來適應大多數(shù)下游應用。

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