Cellutron 說明書

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穩(wěn)定的細(xì)胞系開發(fā)

Cellutron 提供定制的高質(zhì)量穩(wěn)定細(xì)胞系服務(wù)，以優(yōu)化生產(chǎn)您感興趣的蛋白質(zhì)?；虻郊?xì)胞服務(wù)包括基因合成、靶向載體構(gòu)建、細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定細(xì)胞系的藥物選擇和轉(zhuǎn)基因表達(dá)的確認(rèn)。憑借*的載體技術(shù)，Cellutron 能夠在多種細(xì)胞類型中產(chǎn)生穩(wěn)定的細(xì)胞系，包括小鼠和人類干細(xì)胞以及 iPS 細(xì)胞。

穩(wěn)定細(xì)胞系-G      穩(wěn)定細(xì)胞系-R

在熒光報告基因的初始轉(zhuǎn)導(dǎo)兩個月后，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的小鼠胚胎干細(xì)胞表達(dá) GFP 或 RFP。

親代細(xì)胞系：人和小鼠胚胎干細(xì)胞和 iPS、HEK293、CHO、BHK、NS0 細(xì)胞、H9C2 或細(xì)胞系。

穩(wěn)定細(xì)胞系產(chǎn)生的過程和時間線：

1. 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體的基因合成與構(gòu)建            

進(jìn)行優(yōu)化的基因合成并將基因克隆到哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體中（1 周）

2. 轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析      

用表達(dá)載體轉(zhuǎn)染親本細(xì)胞系并通過 RT-PCR/Western blot/ELISA 評估轉(zhuǎn)基因的表達(dá)（1 周）

3. 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子

對頂級克隆進(jìn)行穩(wěn)定性篩選并評估最終細(xì)胞系的 10 次傳代。（約 4 周）

向客戶提供 2 瓶頂級穩(wěn)定克隆

請聯(lián)系客服索取申請表。

肌節(jié) α 肌動蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)染色

心肌細(xì)胞在 60 mm 板中培養(yǎng)

用 1X PBS 沖洗細(xì)胞，在室溫下用 PBS 中的 3.7% 甲醛固定細(xì)胞 10 分鐘，然后在 70% ETOH 中 5 分鐘，用 PBS 中的 0.2% Triton-X 100 孵育 5 分鐘，然后用 1X PBS 洗滌細(xì)胞兩次5分鐘。

用 1ml 2% BSA 的 PBS 孵育細(xì)胞 30 分鐘。在板中加入針對肌節(jié) α 肌動蛋白 (Sigma, Cat#: A2172) 的原代小鼠抗體 1 小時，室溫，O/N，4°C。

用 1X PBS 清洗細(xì)胞 3 次，每次 10 分鐘。

與 HRP 偶聯(lián)的二抗在室溫下針對小鼠孵育 1 小時

用 1X PBS 清洗細(xì)胞 3 次，每次 10 分鐘。

用 1 ml DAB 溶液孵育 10 分鐘。用 1X PBS 清洗。

*在您需要之前準(zhǔn)備新鮮的 DAB（Sigma，Cat#：D8001）溶液：

* 在 37 C 下解凍 DAB 原液，直到不再渾濁。將 5ul 的 DAB 原液添加到 1ml 的 1X PBS 中。加入 1ul 的 30% H2O2 并充分混合。

在顯微鏡下檢查染色的細(xì)胞。

成人心肌細(xì)胞分離

成年大鼠/鼠

貓：ac-7031

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其他的這些是菌株

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