Glycotech協(xié)議

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Glycotech  協(xié)議 1

微量分離純化方法

Stephan Ladisch~國家兒童醫(yī)學(xué)中心癌癥和移植生物學(xué)中心主任，華盛頓特區(qū)，22010

這種溶劑分配方法允許從小樣品和濃度低的樣品中分離，特別是相對(duì)于潛在污染蛋白質(zhì)和其他大分子量物質(zhì)的濃度而言。

協(xié)議 2

使用抗抗體的免疫組織化學(xué)

Tadashi Tai~ 東京都醫(yī)學(xué)研究所腫瘤免疫學(xué)系主任，日本東京

使用與二抗偶聯(lián)的免疫熒光的間接方法是一種相對(duì)簡(jiǎn)單、快速和容易的免疫組織化學(xué)方法。除了細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外抗原外，它適合研究膜抗原，并可應(yīng)用于冷凍組織切片、懸浮細(xì)胞以及附著在載玻片或蓋玻片上的細(xì)胞。

協(xié)議 3

使用糖苷內(nèi)切酶對(duì)糖蛋白進(jìn)行去糖基化

TH Plummer, Jr. 和 AL Tarentino，紐約州衛(wèi)生部生物化學(xué)系，Wadsworth 實(shí)驗(yàn)室和研究中心，紐約州奧爾巴尼 12201

去糖基化的參數(shù)隨每種糖蛋白而變化，并且必須憑經(jīng)驗(yàn)確定(Methods in Enzymology, 1994, 230 : 44-57) 。人轉(zhuǎn)鐵蛋白是包含兩條天冬酰胺連接的-巖藻糖基-雙觸角鏈的糖蛋白的一個(gè)例子，即使在 SDS 中變性后，其中一條也僅由內(nèi)切糖苷酶緩慢釋放。描述了對(duì)人轉(zhuǎn)鐵蛋白的典型測(cè)試反應(yīng)。

協(xié)議 4

基于 ELISA 的敏感糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定

Bruce A. Macher~舊金山州立大學(xué)化學(xué)和生物化學(xué)教授，加利福尼亞州舊金山 94132

該程序允許使用基于ELISA的程序和碳水化合物特異性單克隆抗體檢測(cè)和量化糖基轉(zhuǎn)移酶活性。該程序避免了使用放射性標(biāo)記的底物，并提供了一種檢測(cè)特定產(chǎn)品的方法。

議定書 5

糖脂的免疫染色薄層色譜圖

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

免疫染色薄層色譜圖可以非常靈敏地檢測(cè)蛋白質(zhì)受體的功能活性碳水化合物配體。在糖脂中檢測(cè)到這些碳水化合物結(jié)構(gòu)，這些糖脂來自從相關(guān)目標(biāo)組織中提取的分子的復(fù)雜混合物?？梢苑治龅囊恍┑鞍踪|(zhì)受體是：抗體、嵌合 Ig 蛋白、凝集素、選擇素、毒素和其他碳水化合物結(jié)合蛋白。

議定書 6

高效液相親和色譜法分析寡糖配體

WeiTong Wang~GlycoTech Corporation, Rockville, Maryland 20850

高效液相親和層析 (HPLAC) 是研究碳水化合物結(jié)合蛋白與其配體之間相互作用的有用技術(shù)。HPLAC 的主要應(yīng)用之一是從復(fù)雜的生物混合物中篩選和分離天然配體，例如檢測(cè)、純化和確定體液中碳水化合物配體的結(jié)合常數(shù)。通過提供快速、靈敏和簡(jiǎn)單的 K D值測(cè)定方法，HPLAC 還可用于合理設(shè)計(jì)和合成新的碳水化合物藥物。

議定書 7

平行板流動(dòng)室中的動(dòng)態(tài)流動(dòng)分析

John T. Patton~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

F low 測(cè)定允許在明確的壁剪切應(yīng)力下可視化細(xì)胞粘附。細(xì)胞粘附的不同事件的可視化可以通過選擇性圖像采集和隨后的圖像處理來量化。流動(dòng)測(cè)定特別適用于研究在比大多數(shù)靜態(tài)粘附測(cè)定更短的時(shí)間尺度內(nèi)非常迅速地發(fā)生的粘附事件。此外，可以研究初始事件之后的事件，例如細(xì)胞穩(wěn)定和擴(kuò)散，從而深入了解特定細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)粘附行為的動(dòng)力學(xué)。

議定書 8

靜態(tài)條件下細(xì)胞粘附的測(cè)量

John L. Magnani~GlycoTech Corporation, 羅克維爾, 馬里蘭 20850

許多不同的分子已被描述為促進(jìn)細(xì)胞粘附，包括幾種細(xì)胞表面碳水化合物結(jié)合蛋白。由于洗滌孔產(chǎn)生的剪切力，在方便的 96 孔微量滴定板格式中測(cè)量細(xì)胞粘附很困難。該協(xié)議介紹了使用充滿液體的洗滌室，該洗滌室通過重力分離未結(jié)合的細(xì)胞，從而消除不受控制的剪切力和貼壁細(xì)胞通過液體/空氣界面的通道。該協(xié)議也可用于分析促進(jìn)或抑制細(xì)胞粘附的分子。

議定書 9

完整細(xì)胞對(duì) TLC 板上已溶解糖脂的碳水化合物特異性粘附

Ronald L. Schnaar~約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授，馬里蘭州巴爾的摩市 21205

該程序允許檢測(cè)特定細(xì)胞粘附到 TLC 板上分辨的糖脂。

 

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