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抗 β-肌動(dòng)蛋白兔單克隆抗體加載控制目錄編號(hào): AT0009Actin 是高度保守的蛋白質(zhì)，參與各種類型的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，并在所有真核細(xì)胞中普遍表達(dá)。該抗體在 Jurkat、 A431、 HEK293、 HepG2、 MCF-7、 NIH3T3和 PC12全細(xì)胞裂解物中均呈陽(yáng)性信號(hào)。這種抗體在下列 FFPE 組織中的 iHC 呈陽(yáng)性反應(yīng): 人類正常皮膚和 IF 中的 HeLa 細(xì)胞系。

大小: 100μL 濃度: 1毫克/毫克可用性: 庫(kù)存 概述抗 -β-肌動(dòng)蛋白兔單克隆抗體反應(yīng)性小鼠，大鼠，人體測(cè)試應(yīng)用 WB: 1/1000-1/10000尚未在其他應(yīng)用中測(cè)試。最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。產(chǎn)品圖片 人 β-肌動(dòng)蛋白1-100殘基中的免疫原合成肽?？寺⌒詥慰寺?，克隆號(hào): 9E6同種型兔 IgGForm 液體防腐劑: 0.02% 氮化鈉成分: 1% BSA，PBS。PH7.4貯存指引短期(1-2星期)貯存在攝氏4度以下。分量存放于攝氏零下20度或80度。避免重復(fù)的凍結(jié)/解凍循環(huán)。所有泳道: 1:5000泳道的抗 β-肌動(dòng)蛋白抗體-負(fù)載控制(AT0009)1: Jurkat (人類 T 細(xì)胞淋巴細(xì)胞樣細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物泳道2: A431(人類上皮癌細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物泳道3: HEK293(人類胚胎腎細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物泳道4:HepG2(人肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物巷5: MCF7(人乳腺癌細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物巷6: NIH 3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系)全細(xì)胞裂解物/蛋白質(zhì)每泳道30μg。在1/3000稀釋條件下對(duì)兔 IgG-H 和 L- 預(yù)吸附(HRP)進(jìn)行山羊次級(jí)多克隆。蛋白質(zhì)印跡: β-肌動(dòng)蛋白兔單克隆抗體(AT0009)使用1:1000稀釋的該抗體分析不同裂解物上的 β-肌動(dòng)蛋白。1號(hào)車道: HEK293,2號(hào)車道: Hela，3號(hào)車道: PC-12,4號(hào)車道: NIH/3T3

細(xì)胞骨架由三種類型的胞質(zhì)纖維組成: 微管，微絲(肌動(dòng)蛋白絲)和中間絲。球形微管蛋白亞基包括微管構(gòu)建塊，α/β-微管蛋白異二聚體形成所有真核細(xì)胞共有的微管蛋白亞基。需要 γ-微管蛋白使微管蛋白亞基的聚合成核，從而形成微管聚合物。許多細(xì)胞運(yùn)動(dòng)是由微管作用介導(dǎo)的，包括纖毛和鞭毛的跳動(dòng)，膜囊泡的細(xì)胞質(zhì)運(yùn)輸，減數(shù)分裂/有絲分裂期間的染色體排列和神經(jīng)細(xì)胞軸突遷移。這些運(yùn)動(dòng)是由于競(jìng)爭(zhēng)性微管聚合和解聚或通過(guò)微管運(yùn)動(dòng)蛋白的作用。容量: 100ul容量: 1毫克/毫升可用性: 庫(kù)存概述/小鼠對(duì) β-微管蛋白的單克隆抗體加載控制反應(yīng)性人、小鼠、大鼠、兔、猴、牛、倉(cāng)鼠。經(jīng)測(cè)試的申請(qǐng): 1/2000-1/10000。預(yù)測(cè)分子量: 55kDa。尚未在其他應(yīng)用程序中測(cè)試。最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。產(chǎn)品圖片 這種抗體檢測(cè)內(nèi)源性 β 微管蛋白水平。人 β-微管蛋白氨基末端相應(yīng)的免疫原合成肽?？寺?span>/單克隆，克隆號(hào): 6C4同種型小鼠 IgG1表型液，1mg/mL 小鼠單克隆免疫球蛋白100μg，pH7.3(+/-0.1) ，50% 甘油0.1 mg/mL 牛血清白蛋白(IgG，無(wú)蛋白酶)作為穩(wěn)定劑，0.02% 氮化鈉作為防腐劑。貯存指引短期(1-2星期)貯存在攝氏4度以下。配料及貯存在攝氏零下20度，避免冷凍/解凍循環(huán)。數(shù)據(jù)庫(kù)鏈接 SwissProt: P07437 HumanSwissProt: P99024 MouseSwissProt: P69897 RatHostMouse 應(yīng)用程序 WB ImageWestern 印跡顯示人腦(小腦)組織，人腦(下丘腦)組織，小鼠腦(小腦)組織和小鼠腦(干)組織的裂解物。在大約55kDa (如所示)檢測(cè)到 β 微管蛋白的特異性條帶。本實(shí)驗(yàn)是在還原條件下進(jìn)行的。蛋白質(zhì)印跡程序1。在0.5毫升冰冷的細(xì)胞裂解緩沖液中裂解大約107個(gè)細(xì)胞(配方如下)。該緩沖液是一種修飾的 RIPA 緩沖液，適用于回收大多數(shù)蛋白質(zhì)，包括膜受體、細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白和可溶性蛋白。這種細(xì)胞裂解緩沖制劑可作為一個(gè)單獨(dú)的產(chǎn)品，需要補(bǔ)充蛋白酶抑制劑立即使用前(貓。# FNN0011，溫度計(jì))。其他細(xì)胞裂解緩沖液制劑，如 Laemmli 樣品緩沖液和 Triton-X 100緩沖液，也與本程序兼容。對(duì)于每個(gè)特定的應(yīng)用，可能需要對(duì)細(xì)胞刺激方案和細(xì)胞裂解過(guò)程進(jìn)行額外的優(yōu)化。2.將裂解物以14,000 x g 離心10分鐘，清除細(xì)胞碎片?；蛘撸呀馕锟梢栽?span>100,000 x g 下超離心30分鐘以獲得更大的澄清。3.小心地將澄清的細(xì)胞裂解物倒入干凈的試管中，并用合適的方法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，如布拉德福德試驗(yàn)。建議使用聚丙烯管儲(chǔ)存細(xì)胞裂解物。4.用等體積的2xLaemmli 樣品緩沖液(125mM Tris，pH6.8,10% 甘油，10% sDS，0.006% 溴酚藍(lán)和130mM 二硫蘇糖醇[ dTT ])反應(yīng)裂解物的等分試樣，并在100 °C 下將混合物煮沸90秒。5.將10 ~ 30μg 的細(xì)胞裂解物加入適當(dāng)?shù)膯我话俜直然蛱荻任⒛z孔中，用 SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì)。6.在準(zhǔn)備西藥轉(zhuǎn)移時(shí)，切一塊比凝膠稍大的 PVDF。膜在甲醇中浸泡1分鐘，然后用 DDH2O 沖洗5分鐘?；蛘?，可以使用硝化纖維素。7.在轉(zhuǎn)移緩沖液(配方如下)中浸泡薄膜、2片 Whatman 紙和 Western 儀器海綿2分鐘。8.將凝膠和薄膜組裝到夾層裝置中。9.將蛋白質(zhì)以140mA 的溫度在室溫下轉(zhuǎn)移6 ° C 0-90分鐘。10.轉(zhuǎn)移后，用 Tris 緩沖鹽水沖洗膜2分鐘。11.用封閉緩沖液(配方如下)在4 °C 下封閉膜過(guò)夜，或在室溫下封閉膜一小時(shí)。12.在補(bǔ)充有1% 無(wú) Ig BSA 和0.1% 吐溫 -20的 Tris 緩沖鹽水中以1:1000起始稀釋度將封閉的印跡與一抗在4 °C 孵育過(guò)夜或在室溫下孵育2小時(shí)。13.用添加0.1% 吐溫20的 Tris 緩沖鹽水洗滌印跡。14.使用合適的第二抗體，如山羊抗兔 IgG 結(jié)合的 HRP (Cat。# AT0097-100ul，Engibody)或山羊抗小鼠 IgG 結(jié)合 HRP (Cat。# AT0098-100ul，Engibody)與您的化學(xué)發(fā)光試劑和儀器一起使用。故障排除指南西部印跡故障排除1。沒(méi)有信號(hào)。高背景3。非特定波段4。波段大小錯(cuò)誤5。黑色/灰色污點(diǎn)上的白色條紋6。“抹黑"1。故障排除: 無(wú)信號(hào)樣品準(zhǔn)備•未經(jīng)測(cè)試的物種？積極控制。檢查校準(zhǔn)。?樣本中或凝膠上的抗原不足。轉(zhuǎn)移到膜上•轉(zhuǎn)移不良。?過(guò)度清洗。阻塞•太多阻塞。優(yōu)化封閉劑、濃度和時(shí)間•交叉反應(yīng)封閉劑/抗體?？贵w孵化和檢測(cè)•抗體不足。?第二抗體不正確。•檢測(cè)試劑盒舊基質(zhì)無(wú)效。2.故障排除: 高背景轉(zhuǎn)移到膜. 膜的選擇。阻塞•需要阻塞更長(zhǎng)時(shí)間。•優(yōu)化封堵劑、濃度。•封閉劑與一級(jí)或二級(jí)封閉劑之間的交叉反應(yīng)。?磷酸化特異性蛋白質(zhì): 使用酪蛋白阻斷。抗體孵化和檢測(cè)•一級(jí)抗體濃度過(guò)高。?孵化溫度過(guò)高。3.故障排除: 非特異性條帶樣品制備•細(xì)胞系在其蛋白質(zhì)表達(dá)譜上可以積累差異。•蛋白質(zhì)有多種修飾形式，改變了流動(dòng)性。目標(biāo)蛋白質(zhì)成片段-被蛋白酶降解或切割。•剪接變體/同種型或可能來(lái)自同一家族的蛋白質(zhì)。?蛋白質(zhì)的多聚體(二聚體)(還原和變性)。•樂(lè)隊(duì)可能不是特定的。運(yùn)行無(wú)主控制阻塞•阻塞不足。優(yōu)化注意力，時(shí)間。抗體孵化和檢測(cè)•一級(jí)或二級(jí)抗體濃度過(guò)高。抗體尚未提純。

4.故障排除: 不正確的帶寬大小樣本準(zhǔn)備•確保樣本減少和變性，除非在數(shù)據(jù)表中另有說(shuō)明。•檢查異構(gòu)體。•樣本是否為重組片段？這些將運(yùn)行在不同的大小。5.故障排除: 白色條帶/黑色印跡•過(guò)多的一級(jí)抗體和/或過(guò)多的二級(jí)抗體。6.故障排除: “涂抹"•過(guò)載，蛋白質(zhì)降解。

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