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更新時(shí)間:2024-03-25 09:36:25瀏覽次數(shù):347

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 vectorbuilder代北京試劑vectorbuilder代天津試劑
貨號(hào) vectorbuilder代上海試劑vectorbuilder代陜西試劑 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,食品,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥
主要用途 vectorbuilder湖北試劑vectorbuilder湖南試劑    
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詳細(xì)介紹

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我應(yīng)該使用哪種藥物選擇標(biāo)記?

VectorBuilder在其載體上提供了多種藥物選擇標(biāo)記,如嘌呤霉素(Puro)、新素(Neo)、潮霉素BHygro)和blasticinBsd)??偟膩?lái)說(shuō),我們發(fā)現(xiàn)嘌呤霉素比其他抗生素更快、更穩(wěn)定地殺死非耐藥細(xì)胞。因此,我們建議大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型使用Puro。然而,一些細(xì)胞類(lèi)型可能在沒(méi)有耐藥性基因的情況下自然對(duì)某些抗生素具有一定程度的耐藥性,或者即使有耐藥性基因,它們也對(duì)某些抗生素敏感。這些細(xì)胞需要測(cè)試不同的藥物選擇標(biāo)記物,以找到最佳的標(biāo)記物。

常用藥物的推薦濃度和選擇時(shí)間

抗生素細(xì)胞系推薦濃度推薦持續(xù)時(shí)間

嘌呤霉素293T 1-2微克/毫升3-5

GeneticinG418HT1080 500-1000 ug/ml 7-11

Blasticidin 293T 5-15 ug/ml 7-11

潮霉素B 293T 100-200微克/毫升5-7

我們的VectorAcademy文章《增強(qiáng)培養(yǎng):如何改善細(xì)菌生長(zhǎng)》為優(yōu)化抗生素濃度以及其他培養(yǎng)條件以提高質(zhì)粒產(chǎn)量提供了指南。

筆記

a.使用GeneticinG418)來(lái)選擇表達(dá)新素抗性基因的細(xì)胞。

b.頻繁地使細(xì)胞傳代可以加速殺細(xì)胞素的選擇。

閱讀更多關(guān)于我們的藥物選擇標(biāo)記物集合的信息

流行的ORF

VectorBuilder提供了許多流行的矢量組件,用戶(hù)在設(shè)計(jì)矢量時(shí)可以從中進(jìn)行選擇。下表提供了有關(guān)這些流行組件的詳細(xì)信息,這些組件按類(lèi)別單獨(dú)列出。

名稱(chēng)描述應(yīng)用程序說(shuō)明參考序列

大腸桿菌β-半乳糖苷酶的ORF_Stuffer氨基酸2-83可用作陰性ORF對(duì)照。由VectorBuilder設(shè)計(jì)

熒光記者

名稱(chēng)描述應(yīng)用說(shuō)明顏色結(jié)構(gòu)最大激發(fā)(nm)最大發(fā)射(nm)亮度(EGFP%)參考序列

EGFP增強(qiáng)型綠色熒光蛋白;基于野生型GFP變體優(yōu)化的密碼子,該變體來(lái)自水母維多利亞綠錐蟲(chóng)常用的綠色熒光蛋白;在所有熒光蛋白中亮度、光穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性都很高。綠色單體(可形成弱二聚體)484 507 100核酸研究24:45921996

NLS-EGFP-EGFP具有核定位信號(hào)的兩端核定位。綠色單體(可能形成弱二聚體)484 507 100VectorBuilder設(shè)計(jì)

sfGFP來(lái)自維多利亞綠錐蟲(chóng)的超級(jí)折疊綠色熒光蛋白;GFP變體S30R、Y39N、N105T、Y145F、I171VA20

我什么時(shí)候應(yīng)該使用熒光蛋白、螢光素酶或LacZ?

熒光蛋白、熒光素酶和LacZ都是基于重組蛋白的報(bào)告子,可用于定位或成像研究。然而,這些系統(tǒng)在幾個(gè)重要方面有所不同,這決定了它們適用于不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

熒光蛋白和螢光素酶都是發(fā)光的蛋白質(zhì)類(lèi)型,然后可以用相機(jī)或類(lèi)似設(shè)備檢測(cè)到。熒光蛋白的功能是吸收一種顏色的光(激發(fā)),然后發(fā)射不同顏色的低能量光(發(fā)射)。相反,螢光素酶(和其他生物發(fā)光酶)通過(guò)催化底物(即螢光素)被氧化的化學(xué)反應(yīng)來(lái)產(chǎn)生光,并作為反應(yīng)產(chǎn)物發(fā)射光子。

熒光蛋白比螢光素酶亮得多,螢光素酶有利于許多類(lèi)型的實(shí)驗(yàn),但在組織樣本或活體動(dòng)物中,背景、自發(fā)熒光和光散射

我應(yīng)該使用哪種熒光蛋白?

多年來(lái)已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多熒光蛋白,在實(shí)驗(yàn)中使用哪種熒光蛋白取決于許多因素。

單色實(shí)驗(yàn)

對(duì)于單色實(shí)驗(yàn),綠色FPs是最常見(jiàn)的選擇。EGFP是受歡迎的綠色FP,是許多單色研究的好選擇。然而,其他綠色FP,如TurboGFP(又名maxGFP),可能是某些應(yīng)用的更好選擇。例如,與EGFP相比,TurboGFP具有許多更*的功能,如更亮的綠色熒光、更快的成熟、高pH和光穩(wěn)定性,使其成為受益于早期信號(hào)檢測(cè)和高靈敏度的實(shí)驗(yàn)的理想選擇。如果首紅色FP,mCherry由于其單體結(jié)構(gòu)、良好的熒光性能和低毒性,是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的佳選擇。它特別適用于蛋白質(zhì)標(biāo)記或當(dāng)細(xì)胞對(duì)可能發(fā)生的毒性或蛋白質(zhì)聚集敏感時(shí)

多色實(shí)驗(yàn)

對(duì)于同時(shí)使用多個(gè)熒光團(tuán)(包括FPDAPI等其他染料)的多色實(shí)驗(yàn),研究人員必須仔細(xì)考慮熒光團(tuán)的光譜特性,以確?;诳捎蔑@微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光檢測(cè)中使用的其他硬件上的激發(fā)和/或發(fā)射濾光片,熒光團(tuán)在光譜上是可區(qū)分的?;旧希瑱z測(cè)硬件應(yīng)該能夠在不受其他熒光團(tuán)干擾的情況下從實(shí)驗(yàn)中使用的多個(gè)熒光團(tuán)中的每一個(gè)讀出熒光信號(hào)。這可以通過(guò)使用激發(fā)濾波器(或激光器)來(lái)產(chǎn)生僅激發(fā)感興趣的熒光團(tuán)的適當(dāng)頻率的激發(fā)光來(lái)實(shí)現(xiàn)。也可以通過(guò)使用發(fā)射濾波器僅允許來(lái)自感興趣的熒光團(tuán)的發(fā)射熒光進(jìn)入檢測(cè)器來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)于兩種顏色,標(biāo)準(zhǔn)的綠色FP(如EGFP)加上標(biāo)準(zhǔn)的紅色FP(如mCherr

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET

FPs廣泛應(yīng)用于許多基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的應(yīng)用中。FRET是一個(gè)物理過(guò)程,在此過(guò)程中,激發(fā)的供體發(fā)色團(tuán)分子通過(guò)非放射性偶極-偶極耦合將能量轉(zhuǎn)移到受體發(fā)色團(tuán)。在觀(guān)察中,FRET導(dǎo)致供體熒光的減少和受體發(fā)射的增加。FRET有幾個(gè)先決條件:供體和受體必須非常接近(10-100?);受體的激發(fā)光譜必須與供體的發(fā)射光譜重疊;供體和受體的躍遷偶極取向必須平行。FRET依賴(lài)于距離,并且FRET的效率與供體和受體之間的距離的六次方成反比。因此,它對(duì)距離的微小變化非常敏感,使其成為許多應(yīng)用中的強(qiáng)大工具,例如研究DNA或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),并進(jìn)行投資

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