ELISA實(shí)驗(yàn)失敗的解決方案

1. 試劑盒因素

試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。

不同廠家的試劑一定不能混用，包括底物和洗滌液。由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異，還有抗體、檢測(cè)方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會(huì)導(dǎo)致對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果不一致。如：有的廠家酶標(biāo)板孔間CV值大于20%，標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差，使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。

要注意試劑的批號(hào)和出廠日期，雖然試劑的有效期多為1年，最好選擇剛出廠的試劑盒。

要注意試劑盒的保存條件，一定要按試劑盒規(guī)定的要求保存。

要注意實(shí)驗(yàn)的操作要符合試劑盒說明書的規(guī)定，實(shí)驗(yàn)前要詳細(xì)閱讀說明書

2．標(biāo)本因素和操作因素

血清是常規(guī)的ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

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內(nèi)源性物質(zhì)

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有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

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外源性物質(zhì)

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   外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

   所以，當(dāng)ELISA測(cè)定結(jié)果與預(yù)期或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中不一致時(shí)，應(yīng)該首先考慮試劑因素，這個(gè)是做好實(shí)驗(yàn)獲得正確數(shù)據(jù)的前提保證，其次還有標(biāo)本因素和操作因素等多方面進(jìn)行分析，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用，從而為實(shí)驗(yàn)提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。