谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量測(cè)定試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
Glu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外，Glu 還是wei精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
測(cè)定原理：
利用專用提取液提取，然后用顯色劑進(jìn)行顯色，顯色后在 570nm 下進(jìn)行測(cè)定。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BH6004-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 120ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
說明書 | 1 份 |
試劑二臨用前加入 5ml 蒸餾水充分溶解混勻，用不完的試劑仍 4℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水。
谷氨酸提?。?/span>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1ml 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積（ml）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議取 0.1ml 血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入 1ml 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在有蓋EP 管中加入下列試劑：
試劑名稱（μl） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 250 |
|
試劑一 |
| 250 |
試劑二 | 50 | 50 |
混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 570nm 波長(zhǎng)處記錄吸光值A。△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。
谷氨酸含量計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x 為谷氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
谷氨酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
谷氨酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25ml；V2：加入提取液體積，1 ml；V3：加入血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積，0.1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0037x- 0.5255； x 為谷氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
谷氨酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2）=2703×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
谷氨酸含量(µg/g 鮮重)= [(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(△A+0.5255)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25ml；V2：加入提取液體積，1 ml；V3：加入血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積，0.1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。
注意：
1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測(cè)定，檢測(cè)下限為 100µg/ml。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：100µg/ml -600µg/ml。
3、ΔA 線性范圍為：0.01-1；若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
