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Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

MCE 國(guó)際站：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K1073

中文名稱(chēng)：Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

存儲(chǔ)條件：-20°C，1年避光保存，避免反復(fù)凍融

產(chǎn)品活性：MCE Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可方便、快捷的檢測(cè)細(xì)胞凋亡。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光（Annexin V-/PI-），早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

生物活性：MCE Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用 FITC 標(biāo)記的重組人Annexin V 檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS) 位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞凋亡早期， PS 會(huì)外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。 Annexin V （膜聯(lián)蛋白 V）是一種 Ca2+ 依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，可與 PS 特異性結(jié)合，因此Annexin V 常作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。Annexin V 經(jīng) FITC 標(biāo)記后可發(fā)綠色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）染色液是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色熒光染料，可對(duì)凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。經(jīng) Annexin V-FITC 和 PI 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光（Annexin V-/PI-）早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光（Annexin V+/PI+）。

操作流程：細(xì)胞與 Annexin V-FITC 和 PI 孵育 1. 收集細(xì)胞：收集 1-5 × 105 個(gè)細(xì)胞。 懸浮細(xì)胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。 貼壁細(xì)胞：小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細(xì)胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。 注：建議胰酶消化液不含 EDTA。 2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細(xì)胞。 3. 加入 5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻。 4. 加入 10 μL PI Stain，輕輕混勻。 5. 室溫下避光孵育 10-20 min。 注：孵育過(guò)程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強(qiáng)染色效果。 6. 檢測(cè)與分析 6.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。 注： a. 流式檢測(cè)時(shí)，Annexin V-FITC 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 525 nm，在 FL1 通道檢測(cè)；PI-DNA 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 535 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 617 nm，在 FL2 或FL3 通道檢測(cè)。 b. 建議設(shè)置三組對(duì)照：未染色組、PI 單染組及 Annexin V-FITC 單染組。 6.2 熒光顯微鏡檢測(cè)：1000 g 離心 5 min，棄去上清，加入 50-100 μL Binding Buffer 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，涂片后用熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

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