大鼠elisa 大鼠血清腎損傷分子1（Kim1）檢測(cè)elisa

大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa北京方程生物公司現(xiàn)貨供應(yīng)

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa水平。用純化的大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa ，再與 HRP標(biāo)記的大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 （OD值） ，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa濃度。

 

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為500pg/mL）。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 4. 生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。5. 酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

 

Elisa實(shí)驗(yàn)可能會(huì)出現(xiàn)的問題及解決辦法：1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。a.原因：未加入酶標(biāo)記物。解決辦法：請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。c.原因：室溫太低。解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請(qǐng)于操作步驟4，適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。解決辦法： 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。e.原因：試劑盒已過有效期限。解決辦法：請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，或是平行性不好。a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。解決辦法： 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。b.原因：操作時(shí)間拖太久。解決辦法：請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。c.原因：微孔間相互污染。解決辦法： 加樣品時(shí)，請(qǐng)小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。d.原因：標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不*。解決辦法：請(qǐng)使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。解決辦法：加樣品或試劑時(shí)，吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。解決辦法：請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板機(jī)洗板過程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。a.原因：室溫太高(>25℃)。解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請(qǐng)適當(dāng)縮短步驟4的溫育時(shí)間。b.原因：底物溶液受到污染。解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色，請(qǐng)不要再使用。c.原因：反應(yīng)時(shí)間超過太久。解決辦法：請(qǐng)控制反應(yīng)時(shí)間。d.原因：酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)4. 陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。b.原因：洗板過程發(fā)生問題(同2-f.)。解決辦法：請(qǐng)參考2-f.c.原因：添加樣品或酶標(biāo)記物的量不*。解決辦法： 請(qǐng)參考2-d.

 

 樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

大鼠血清腎損傷分子1(Kim1)檢測(cè)elisa

胰島素樣生長(zhǎng)因子2-mRNA結(jié)合蛋白2(IGF2BP2)檢測(cè)elisa

AMPA離子能谷氨酸受體1(GRIA1)檢測(cè)elisa

細(xì)胞骨架關(guān)聯(lián)蛋白2樣蛋白(CKAP2L)檢測(cè)elisa

內(nèi)脂素(VF)檢測(cè)elisa

雌激素受體β(ERβ)檢測(cè)elisa

白介素10受體α(IL10Rα)檢測(cè)elisa

肝細(xì)胞核因子6β(HNF6β)檢測(cè)elisa

白介素35(IL35)檢測(cè)elisa

FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)檢測(cè)elisa

組織蛋白酶A(CTSA)檢測(cè)elisa