MDHS-0003 細胞種屬鑒定

一、細胞種屬鑒定服務(wù)簡介

細胞系作為正常或腫瘤組織的模式細胞被廣泛應(yīng)用于科學研究和藥物開發(fā)，然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代，由于科學界無法解決此類問題以致大量因使用錯誤鑒定的細胞系而導致誤導或存在潛在錯誤的學術(shù)論文發(fā)表。

培養(yǎng)物的交叉污染以及隨后污染細胞的過量生長是另一個引起細胞系錯誤鑒定的常見原因。這種情況發(fā)生的幾率在以下條件會增加：試劑的共用、操作時反復(fù)使用相同的未經(jīng)徹D消毒和清場的工具及設(shè)備、在沒有充分分離每一細胞類型情況下同時對多個培養(yǎng)物進行操作。當交叉污染發(fā)生時，一種細胞類型迅速生長而超過另一種，在4-5次細胞傳代后，一個純的污染細胞培養(yǎng)物將會形成。

在使用其它物種的滋養(yǎng)層（例如小鼠3T3細胞）來繁殖人類干細胞或原始細胞時有意地共培養(yǎng)會導致交叉污染或人類細胞系過生長。正常情況下，滋養(yǎng)層細胞處于無增殖狀態(tài)，但只要生長抑制程序不w全，它就會不斷繁殖并逐步取代人類細胞。體細胞雜交雖不常見但也會發(fā)生，如人類套細胞淋巴瘤細胞系NCEB-1就攜帶了小鼠的七條染色體。

異種移植也會導致細胞系交叉污染和錯誤鑒定，來自異種移植的復(fù)蘇細胞會被宿主動物細胞所替代。

一般而言，交叉污染最終的結(jié)果將會是少量適應(yīng)細胞且快速的替代。兩個細胞系不能持續(xù)共存于同一個培養(yǎng)環(huán)境，除非它們是共生關(guān)系，但這種情況據(jù)我們所知還未有報道。一個細胞群經(jīng)過許多次傳代后還能包含一個穩(wěn)定的混合基因組，唯Y已知的情況是體細胞雜交。

通過對細胞錯誤識別和交叉污染長達50年的追蹤和研究，STR分型方法已成為對人源細胞和小鼠細胞進行鑒定的標準方法，然而該方法的弊端是不能進行其他物種的鑒定，并無法識別不同物種間的交叉污染。

美德華生細胞種屬鑒定：我公司CELL STR ID®細胞種屬鑒定及種間交叉污染質(zhì)控檢測體系,通過對人、小鼠、大鼠、非洲綠猴、倉鼠、豬、狗、牛、羊、兔等10種種屬特異性基因COI進行特異探針序列設(shè)計，并進行同時擴增和檢測，因每種種屬的特異基因片段大小特異，通過判斷各自特異性序列是否擴增以及出現(xiàn)的片段大小就可以判斷待檢樣本是否特定種屬以及是否有多種種屬DNA共存。通過該體系檢測只需要單次實驗就可以快速判斷待檢細胞樣本是否人源或其它種屬DNA或多種屬DNA交叉污染。

提供細胞及其制劑的同源性質(zhì)控及交叉污染監(jiān)控服務(wù)，只為細胞可靠身份放行。

用種屬熒光復(fù)合引物 MIX 對動物線粒體 COI 基因進行擴增（參考文獻：Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach， In Vitro Cellular & Developmental—Animal (2007)。

二、細胞種屬鑒定服務(wù)內(nèi)容

（一）細胞種屬鑒定服務(wù)流程

（二）細胞種屬鑒定服務(wù)特點

1．用種屬熒光復(fù)合引物 MIX 對動物線粒體 COI 基因進行擴增、擴增產(chǎn)物在 ABI 3130XL 型遺傳分析儀上進行毛細管電泳檢測和分析。

2．靈敏度高?？梢澡b別細胞樣本中含有的少量人、小鼠、大鼠、非洲綠猴、倉鼠、豬、狗、牛、羊、兔等10種種屬細胞污染，檢測線為皮克級。

3．參考國際細胞鑒定委員會（ICLAC）發(fā)布的動物細胞種屬鑒定標準（ASN-0003）。

4．鑒定報告中文版或中英版（自選），以及圖譜（見細胞種屬鑒定檢測圖譜）。

（三）細胞種屬鑒定注意事項

1．樣品寄送：用戶提供DNA或細胞 樣本，加冰袋運輸；同時請注明細胞數(shù)量或DNA含量，DNA 含量大于50ng/μl，體積大于20μl。如提供細胞，請?zhí)峁㏄BS細胞懸浮液，離心沉淀，去上清液，可常溫特快專遞運輸（京外客戶推薦方法）；細胞數(shù)量≥10⁶個。

2．正常檢測周期5-7個工作日，加急2-3個工作日。

3．本單位所提供的細胞種屬鑒定可分為科研級，工業(yè)級?？蒲袡z測：遵循ISO17025原則，樣本、數(shù)據(jù)長期保存，不支持現(xiàn)場審查；工業(yè)級：遵循ISO17025原則，樣本、數(shù)據(jù)長期保存，支持現(xiàn)場審查。

（四）細胞種屬鑒定結(jié)果交付

檢測結(jié)果以電子版的形式發(fā)放到訂單或合同上面預(yù)留的郵箱，書面報告可根據(jù)需要隨時提供，寄送到貴單位。

三、細胞種屬鑒定結(jié)果解釋：

1、參考國際細胞鑒定委員會（ICLAC）發(fā)布的動物細胞種屬鑒定標準（ASN-0003）Species-Level Identification of  Animal Cells through Mitochondrial Cytochrome c Oxidase Subunit 1 (CO1) DNA Barcodes。

2、內(nèi)參基因與特定種屬均有擴增特異峰，表示該樣本為特定種屬。若出現(xiàn)多個種屬均由特異擴增峰，則提示該樣本有多種不同種屬DNA存在。

四、種屬復(fù)合擴增MIX表

五、種屬鑒定及種間交叉污染質(zhì)控檢測圖譜及參考文獻

參考文獻：

4.1、 Capes-Davis, A., Theodosopoulos, G., Atkin, I., et al. (2010) Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines. Int. J. Cancer 127 (1), 1?8

4.2、Cell Lines as Biological Models: Practical Steps for More Reliable Research

4.3、Cases of Mistaken Identity   2007

4.4、ATCC SDO Workgroup ASN-0002 (2010) Cell line misidentification: the beginning of the end.