XSL0132 腦外損傷動(dòng)物模型 精神科模型

腦外損傷動(dòng)物模型 精神科模型

創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)是指由于外部機(jī)械力的作用導(dǎo)致大腦的損傷,臨床發(fā)病率逐年上升。 為了更好的研究這 些問題的發(fā)病機(jī)制,了解路腦外傷病理生理過程,并制定出新的治療方法,建立良好的動(dòng)物模型顯得至關(guān)重要。

復(fù)制方法：

1、健康雄性大鼠，體重為230～260g。采用改進(jìn)的Feeney自由落體硬膜外撞擊方法。損傷裝置由底 板、固定支架、垂直導(dǎo)桿、下落擊錘和聚乙烯撞擊圓錐組成。撞擊圓錐頭端直徑為4mm、高為2.5mm。

2、經(jīng)腹腔注射水he氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)或戊芭比妥鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)麻 醉。

3、將其頭部固定于立體定向儀上，剪去頂部毛發(fā)，手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。沿中線左側(cè)切開頭皮，分離 骨膜，用牙科鉆于中線旁2mm、緊挨冠狀縫后開一直徑5mm的圓形窗，硬膜保持完整。

4、用20g砝碼于10cm和30cm高處通過一金屬導(dǎo)桿墜落，撞擊置于硬膜上的圓錐上致輕、中型損傷， 另用40g砝碼于25cm高處墜落致重型損傷。輕、中、重三型損傷的致傷沖擊力分別為200g·cm、600g·cm 和1000g·cm，用鋅汀粉封閉骨窗，縫合頭皮，置鼠籠喂養(yǎng)。

檢測(cè)指標(biāo)：

1) 腦含水量測(cè)定 動(dòng)物斷頭處死后，30s內(nèi)取出大腦，用濾紙吸盡腦表面xue漬后，銳性分離左側(cè)頂葉皮 質(zhì)約100mg，用電子分析天平稱濕重后，置于110℃恒溫干燥箱內(nèi)烤干(24h)，稱干重。用Elliot公式計(jì)算各 部位腦含水量百分率：腦含水量(％)＝[(濕重－干重)/濕重]×100 ％

2) 血腦屏障定量測(cè)定 動(dòng)物于損傷前1h注射2％伊文斯藍(lán)(3ml/kg體重)。在取腦組織前，為清除血液中 染料，可用生理鹽水經(jīng)左心室灌注至右心室流出清亮液體為止。取損傷側(cè)皮質(zhì)分別稱重，加入二倍體積的 二甲基甲酰胺，50℃水浴中孵育72h，1500g離心，離心10min，取上清液。應(yīng)用分光光度計(jì)在伊文斯藍(lán)zui 大吸收光譜635mm處檢測(cè)吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得伊文斯藍(lán)含量，結(jié)果以μg/g腦組織表示。

3) 病理學(xué)觀察 損傷后24h再次麻醉，經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注生理鹽水150ml，繼之快速灌注冰冷的4％哆 聚甲醛200ml，隨后再用其300ml在2h內(nèi)慢速灌注，取腦組織浸入4％哆聚甲醛內(nèi)4℃后固定48h，常規(guī)乙醇 脫水，石蠟包埋，行5μm冠狀切片，作HE染色及尼氏小體染色，光鏡下觀察。若采用透射電鏡觀察者，灌 注液為4%哆聚甲醛和2%戊2醛/0.1MPB(pH7.4)，隨后浸入2%戊2醛/0.1MPB(pH7.4)內(nèi)，4℃固定過夜.常規(guī)脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋.鉛.鈾染色，透射電鏡觀察。

模型特點(diǎn):
1)腦含水量變化輕型腦損傷傷后30min，傷側(cè)腦皮質(zhì)含水量開始升高，3h顯著升高，24h達(dá)高峰，為80％左右。72h含水量有所降低，至損傷后168h腦含水量恢復(fù)正常。中型腦損傷傷后15min，傷側(cè)皮質(zhì)含 水量即已升高，30min顯著升高，6h達(dá)高峰，也為80％左右，持續(xù)至24h。至168h含水量基本恢復(fù)正常。 重型腦損傷傷后其傷側(cè)皮質(zhì)含水量于傷后15min明顯升高，傷后3～6h達(dá)高峰，持續(xù)至72h。傷后168h腦含 水量仍高于正常對(duì)照值。

2) 血腦屏障定量測(cè)定 腦損傷后血腦屏障通透性明顯增高，并隨損傷程度的加重而加重。在損傷15min 后，損傷側(cè)皮質(zhì)伊文斯藍(lán)含量就明顯增高，輕、中型于6h達(dá)高峰，重型者3h達(dá)高峰，24h開始下降。

3) 組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)改變

① 光鏡觀察 輕型損傷后24h光鏡觀察，見神經(jīng)細(xì)胞周圍出現(xiàn)水腫，尼氏小體染色變淺，微血管外間隙 擴(kuò)大；中型損傷后24h，神經(jīng)細(xì)胞周圍水腫，微血管外間隙增大更為明顯；重型損傷后24h，皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞 周圍水腫明顯，尼氏小體染色明顯變淺，微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，管腔狹窄更加明顯。

② 透射電鏡觀察 輕型損傷傷后24h，傷側(cè)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞線粒體明顯腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張。神經(jīng)細(xì)胞 周圍神經(jīng)氈腫脹，微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞飲小泡增多、腫脹、管腔狹窄。膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)水腫改變，特征同神經(jīng) 細(xì)胞，但改變較輕微；中型損傷后24h神經(jīng)細(xì)胞線粒體及神經(jīng)氈空泡樣變，微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹及管腔狹 窄明顯；重型損傷傷后24h，絕大部分神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見到空泡樣變的少數(shù)線粒體及高度擴(kuò)張的 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞核染色質(zhì)邊聚，染色變淡，核膜皺縮。神經(jīng)氈完quan空泡樣變。微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹更加明顯，胞飲增多，管腔明顯狹窄。 

比較醫(yī)學(xué)：

此模型為自由落體腦損傷，屬機(jī)械性損傷，類似臨床上的加速傷。由于損傷部位局限，所造成的局部 腦損傷性質(zhì)與臨床上見到的腦挫裂傷相似。

該模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：

①損傷機(jī)制單一便于定性研究。

②方法簡(jiǎn)單，條件易于控制，采用自由落體打擊法，可根據(jù)需要控制高度和重量。

③致傷程度較一致，重復(fù)性好。

④腦水腫性質(zhì)與臨床上創(chuàng)傷性腦水腫相似，定量準(zhǔn)確。

⑤實(shí)驗(yàn)對(duì)象采用大鼠，價(jià)廉、抗病、便于大批定量研究和長(zhǎng)時(shí)間觀察。

此方法也可采用小鼠和新西蘭白兔。

小鼠：將小鼠固定在自由落體腦損傷裝置的底部平臺(tái)上，用直徑約4mm的撞擊錘尖duan頂在小鼠顱骨矢狀面 左側(cè)2～4mm處，取50g砝碼，從15cm高處自由落下，通過撞擊錘造成閉合性腦外傷模型動(dòng)物。

兔子：于頭頂部正中矢狀位切開至顱骨表面，分離兩旁軟組織，微型鉆頭在右頂骨上四點(diǎn)鉆孔。線鋸鋸開 骨橋，在右頂骨上形成直徑為1.5cm×1.5cm的方形骨窗。置入打擊墊于硬膜外，用800g·cm的打擊能量使 腦組織造成挫裂傷。還納骨瓣，骨縫用醫(yī)用EC膠封閉，縫合頭皮。 

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