SPR/BLI分子互作檢測服務(wù)

親和力是評價(jià)可逆反應(yīng)過程中兩個(gè)分子間相互作用強(qiáng)弱的特征參數(shù)，是了解分子以及識(shí)別生物學(xué)過程、藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選等的重要指標(biāo)。蛋白質(zhì)相互作用/親和力檢測可應(yīng)用于藥物早期研究開發(fā)、篩選鑒定、臨床前與臨床研究以及下游生產(chǎn)質(zhì)控等各個(gè)環(huán)節(jié)，而且在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、生物制藥開發(fā)等領(lǐng)域也有應(yīng)用。業(yè)內(nèi)常用的檢測技術(shù)有表面等離子共振（Surface plasmon resonance, SPR）和生物膜干涉技術(shù)（Bio-Layer Interferometry, BLI）。

義翹神州擁有豐富和高質(zhì)量的蛋白資源，如Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白等，可提供利用BLI技術(shù)（Octet儀器）和SPR技術(shù)（Biacore儀器）為客戶提供高質(zhì)量一體化的分子互作檢測服務(wù)，包括抗體篩選、活性檢測、表位作圖、一致性評價(jià)和質(zhì)量控制檢測服務(wù)。

Biacore/Octet親和力檢測服務(wù)范圍

SPR/BLI親和力檢測平臺(tái)

義翹神州基于Biacore平臺(tái)與ForteBio Octet 平臺(tái)為客戶提供快速準(zhǔn)確的親和力測定服務(wù)，與其他互作分析技術(shù)相比，如ELISA、免疫共沉淀、酵母雙雜交，有著實(shí)時(shí)、無標(biāo)記、可檢測低親和的顯著優(yōu)-勢，能夠?qū)崿F(xiàn)對分子間親和力的準(zhǔn)確檢測。

我們的優(yōu)勢與能力

豐富的蛋白產(chǎn)品支持（FcRn，F(xiàn)cγR， 靶點(diǎn)蛋白等）
義翹神州擁有豐富的蛋白資源，全面覆蓋Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白、細(xì)胞因子、蛋白酶和SARS-CoV-2病毒蛋白等，為您提供高質(zhì)量一體化的分子互作檢測服務(wù)。

服務(wù)內(nèi)容

客戶提供

1. 樣品類型、濃度、分子量、種屬、標(biāo)簽等信息
2. SPR：1）分析物樣品中不含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分；2）氨基偶聯(lián)的配體溶液中不含有tris、NaN3等成分；3）小分子需要明確有機(jī)溶劑信息
    BLI： 1）分析物樣品中不含有高濃度的高聚物物質(zhì)，如PEG等；2）氨基偶聯(lián)的配體溶液中不含有tris、NaN3等成分

案例分享

義翹神州擁有7000+優(yōu)質(zhì)的靶點(diǎn)蛋白，如Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白等，檢測中心獲得CNAS資質(zhì)，可提供抗體篩選、表征和Fc受體檢測等，助力抗體藥IND申報(bào)。

抗體與Fc受體蛋白親和力測定

• Fc受體蛋白與抗體親和力測定（BLI）

抗體與補(bǔ)體親和力測定

• 抗體與補(bǔ)體親和力測定（BLI）

人抗體IgG1與補(bǔ)體C1q結(jié)合，親和力測定結(jié)果為2.58×10-8 M（BLI）。

生物大分子間相互作用

• 生物大分子間相互作用（SPR/BLI）

一致性評價(jià)

• 一致性評價(jià)（SPR）

抗體篩選

• 抗體篩選（SPR）

以下Biacore實(shí)驗(yàn)，篩選針對靶標(biāo)3個(gè)細(xì)胞上清，目的是得到可高表達(dá)、與靶標(biāo)高親和抗體的細(xì)胞株，從以下篩選數(shù)據(jù)判斷，127號(hào)細(xì)胞株符合要求。

SPR/BLI親和力測定服務(wù)常見問題解答

• SPR與BLI之間有哪些差異以及各自的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)是什么？

抗原與抗體的親和力測定在藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選、藥效評價(jià)等階段是一項(xiàng)重要工作。親和力是評價(jià)可逆反應(yīng)過程中兩個(gè)分子間相互作用強(qiáng)弱的特征參數(shù)，是了解分子以及識(shí)別生物學(xué)過程、藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選等的重要指標(biāo)。
SPR和BLI技術(shù)作為表征生物分子相互作用動(dòng)力學(xué)的兩種技術(shù)，一直占據(jù)主導(dǎo)地位。SPR和BLI在親和力檢測中各具優(yōu)-勢，其均可以獲得親和力準(zhǔn)確數(shù)值以及相應(yīng)的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，SPR 具有比BLI 更長的歷史，具有更-高的靈敏度，在分辨方面更好；但SPR所需儀器維護(hù)較多，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的樣品不可回收。BLI可以提供更-高的通量和更短實(shí)驗(yàn)周期，但溫度控制范圍有限且實(shí)驗(yàn)過程中面臨樣品蒸發(fā)的挑戰(zhàn)。更多內(nèi)容詳見下表。
如果您有興趣使用義翹神州SPR/BLI分子互作服務(wù)來支持您的研究發(fā)現(xiàn)，您可以通過以下方式進(jìn)行咨詢。

• Biacore檢測過程中，如果為病毒樣本，儀器需要消毒嗎？如何做清洗？

每次檢測完病毒樣本后均需要對儀器至少進(jìn)行Desorb清洗，除去管路中殘留的樣品，同時(shí)進(jìn)行sanitize清洗除菌，防止管路中微生物生長阻塞管路對儀器造成損壞。

• 親和力分析一般選擇哪種緩沖液？對蛋白緩沖液有什么要求？

親和力分析常用的緩沖液為PBS或者HBS；使用NTA傳感器時(shí)緩沖液中不得含有EDTA；使用AR2G /CM5傳感器時(shí)配體蛋白緩沖液中不得含有其他氨基物質(zhì)，如tris；使用APS 傳感器時(shí)緩沖液中不得含有任何去污劑。

• 小分子化合物可以做親和力檢測嗎？如果進(jìn)行親和力檢測，需要用DMSO溶解嗎？

小分子化合物可以做親和力檢測，需不需要使用DMSO溶解，取決于小分子本身的溶解性質(zhì)。如果需要DMSO才能溶解，那么在SPR親和力分析時(shí)需要進(jìn)行溶劑校正。

義翹神州同時(shí)擁有兩種平臺(tái)（SPR和BLI），可提供包括蛋白、抗體、DNA/RNA、脂類、多糖、多肽、小分子化合物、病毒、細(xì)胞、細(xì)菌、納米材料等多樣品類型的高通量親和力檢測。根據(jù)客戶檢測需求，可選擇單一平臺(tái)或兩種平臺(tái)進(jìn)行活性驗(yàn)證，助力您完成研發(fā)項(xiàng)目。

• 穩(wěn)態(tài)分析一般親和力會(huì)相對較弱嗎？

穩(wěn)態(tài)分析只是一種擬合方式，適用于快結(jié)合快解離的結(jié)合方式，與親和力大小無關(guān)。無論是快結(jié)合快解離，還是慢結(jié)合慢解離，只是不同的動(dòng)力學(xué)方式，有可能具有相同的親和力。

• 使用BLI技術(shù)測定親和力過程中出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí)，要如何解決呢？

非特異性結(jié)合是親和力檢測過程中經(jīng)常遇到的問題。使用BLI技術(shù)（Octet設(shè)備）測定親和力出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí)，解決方法為：
1）除添加牛血清白蛋白（BSA）外，建議在分析物緩沖液中加入0.02% Tween-20， 以去除疏水作用所導(dǎo)致的非特異性吸附；
2) 將具有非特異性的物質(zhì)固化在傳感器上；
3) 適當(dāng)降低分析物的濃度；
4) 更換傳感器，比如從SA傳感器或者Capture類的傳感器變成APS傳感器或者 SSA 傳感器。
5) 更換或調(diào)整緩沖液。

• 使用SPR技術(shù)測定親和力過程中出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí)，要如何解決呢？

使用SPR技術(shù)（Biacore設(shè)備）測定親和力出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí)，不同情況及解決方法如下：
1） 與參比通道的非特異性結(jié)合---向分析物溶液中添加可溶性的葡聚糖，以競爭性抑制與傳感芯片表面上葡聚糖的非特異性結(jié)合。
2） 與配體分子的非特異性結(jié)合---該種非特異不在參比通道上產(chǎn)生響應(yīng)值，但通常表現(xiàn)為與配體通道的非飽和結(jié)合。若混合樣品中含有如細(xì)胞裂解物或血清中的非分析物組分，則也可能與配體結(jié)合，盡量減少這類結(jié)合的一般原則是在樣品和運(yùn)行緩沖液中使用生理水平或更-高的離子強(qiáng)度，而且如果表面活性劑不影響親和力分析，則應(yīng)添加表面活性劑，如果上述措施沒效果，則應(yīng)更換其它配體。
有時(shí)分析物會(huì)無選擇地結(jié)合到配體上（例如，許多低分子量化合物以低親和力結(jié)合到血清白蛋白上的多個(gè)位點(diǎn)，在表現(xiàn)上類似于非特異性結(jié)合），在該情況下，從相對低濃度的分析物樣品的傳感圖中有可能獲得關(guān)于高親和力結(jié)合位點(diǎn)的有用信息，因?yàn)榈蜐舛葧r(shí)樣品中低親和力結(jié)合并不顯著，調(diào)整緩沖條件有助于降低無選擇性結(jié)合的影響。

• 如何使用Biacore檢測細(xì)胞或者病毒樣本（例如潛在的大顆粒樣本）？

以檢測細(xì)胞樣品為例：
細(xì)胞首先需要樣品前處理：①離心后棄上清；②加入PBS重復(fù)清洗3次樣品，細(xì)胞濾網(wǎng)過濾掉聚集的細(xì)胞，③加入醋酸鈉，將過濾后的細(xì)胞調(diào)整稀釋至合適的細(xì)胞密度，如：4E4 cell/mL。

• 如何使用Biacore儀器進(jìn)行表位分析？

利用Biacore的抗原表位作圖方法進(jìn)行分析，有兩種方法。
一種方法為配對檢測，在芯片表面固定一種抗體，將抗原結(jié)合到抗體上；然后流經(jīng)第二種抗體時(shí)，檢測是否能夠同時(shí)結(jié)合到抗原上；
另一種方法為基于肽段抑制檢測的抗原表位作圖，某一抗原結(jié)構(gòu)表位的肽段將直接抑制抗體與抗原上該表位的結(jié)合。

• 如何對帶有同樣融合標(biāo)簽的兩個(gè)蛋白做親和力分析？

可以通過氨基偶聯(lián)直接固化其中一個(gè)蛋白，另外一個(gè)蛋白作為分析物進(jìn)行檢測。也可以使用捕獲法，在固化完成后，使用帶有相同標(biāo)簽的無關(guān)蛋白封閉傳感器。需要注意的是，封閉步驟要達(dá)到飽和，而且封閉需牢固，即封閉完成后的基線達(dá)到平穩(wěn)狀態(tài)。在滿足封閉和穩(wěn)定的情況下，就可以進(jìn)行分析物的結(jié)合和解離。