包蟲病犬糞抗原檢測(cè)試劑盒

          本試劑采用ELISA方法用于犬糞便中包蟲抗原的檢測(cè)。

1.  樣品處理   犬糞樣品需要預(yù)先低溫（-70℃以下）冷凍7天以上，以滅活蟲卵。稱取1克犬糞,加入1ml已稀釋的糞便處理液，充分?jǐn)嚢杌靹?，靜置10分鐘，再經(jīng)5000rpm離心30分鐘，取上清液檢驗(yàn)。

2.  洗滌液配制  用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

3.  加樣反應(yīng)   每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性及空白對(duì)照各1孔；其中陰、陽對(duì)照孔分別加入陰性、陽性對(duì)照各100ul，空白對(duì)照孔加入樣品稀釋液（5號(hào)液）2滴。其它各樣本檢測(cè)孔先滴加樣品稀釋液（5號(hào)液）各1滴，再取犬糞上清液50ul加入板孔中。37℃下避光反應(yīng)30分鐘，甩去孔內(nèi)液體。用已稀釋的洗滌液洗滌4次，每次靜止1分鐘，拍干。

4.  加酶反應(yīng)   除空白孔外，各孔加酶結(jié)合物2滴。37℃下避光反應(yīng)30分鐘，甩去孔內(nèi)液體。用已稀釋的洗滌液 洗滌3次，每次靜止1分鐘，拍干。

5.  顯色反應(yīng)   加底物液（3號(hào)液）和顯色劑（4號(hào)液）各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液（6號(hào)液）1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

       陰性對(duì)照呈無色或淺黃色，陽性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。

       以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對(duì)照A值平均值的3.1倍者判為陽性。如陰性對(duì)照A值的平均值低于0.10時(shí)按0.10計(jì)算。

1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不可混用。

5.應(yīng)采集新鮮的犬糞樣本進(jìn)行測(cè)試。若不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)將糞樣放置低溫凍存，防止腐敗或反復(fù)凍融。如犬糞難以溶解，應(yīng)適當(dāng)搗碎處理。任何樣本都應(yīng)作為傳染源來處理。

6.37℃孵育時(shí)，建議使用水浴箱。如無條件，可使用濕盒放入溫箱并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。

7.濃縮洗滌液及濃縮糞便處理液若出現(xiàn)結(jié)晶時(shí)，應(yīng)置37℃至溶解。