梅里埃（HIV 1+2）抗體及（HIV 1P24）抗原聯(lián)合檢測試劑

Murex人類免疫缺陷病毒抗體（HIV 1+2）及抗原（HIV1 P24）聯(lián)合檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
用途
本品用于人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1及HIV-1型O群）、HIV-2型抗體及HIV1 P24抗原的檢測。
摘要和試驗說明
兩種的人類免疫缺陷病毒HIV-1，HIV-2是引起獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）的病原體，這兩種逆轉(zhuǎn)錄病毒是通過接觸受感染的體液傳播的，主要通過血液、生殖器分泌物和母嬰傳播。據(jù)報道HIV-1的感染遍及，而HIV-2的感染主要發(fā)生在西非和一些歐洲國家。
這兩種病毒的gag蛋白和pol蛋白有很強的抗原交叉反應(yīng)，但其膜（區(qū)）的糖蛋白卻很少有交叉反應(yīng)。
如果用于篩查，就需要用這兩種病毒的膜蛋白表位及具有交叉反應(yīng)的（核心區(qū)）gag或pol蛋白作抗原，以確保能檢測出這兩種病毒不同感染階段的抗體。HIV-1變種均歸為HIV-1 O亞型，是在科麥隆和歐洲的病人樣品中檢測出來。O亞型和初己知的HIV-1（均歸為M群）型有很大差別。因根據(jù)交叉反應(yīng)來識別亞型并不令人滿意，故可用此病毒膜區(qū)的特異性抗原位點來檢測感染個體的O亞型抗體。感染HIV后，早出現(xiàn)的特異性抗體是IgM，隨后才出現(xiàn)IgG。通過檢測IgM和IgG可以靈敏地檢測出抗-HIV陽轉(zhuǎn)血清，而HIV核心蛋白在抗體陽轉(zhuǎn)前的就能檢測出來。
Murex HIV抗原／抗體試劑盒用來檢測HIV-1和HIV-2（的外膜）有反應(yīng)性的HIV核心抗原，以及膜區(qū)糖蛋白的IgG、IgM和IgA抗體、HIV—1和HIV—2有交叉反應(yīng)pol蛋白，因此，可用于對潛在感染的血清、EDTA血漿或檸檬酸血漿的檢測。
操作原理
Murex HIV抗原／抗體聯(lián)檢試劑盒是用HIV-1（O）免疫決定簇的合成多肽、重組的HIV—1pol蛋白和HIV-1，HIV-2膜（區(qū)）蛋白及抗HIV-1 p24單克隆抗體包被微孔板，用辣根過氧化酶標(biāo)記的相同抗原和抗p24的其他單克隆抗體的混合物為酶結(jié)合物。
被檢樣品或?qū)φ昭逶谖⒖装逯蟹跤?，樣品或?qū)φ昭逯械腍IV核心區(qū)抗原和／或HIV抗體與包被板上的抗體和／或抗原結(jié)合，洗去多余部分。然后加入酶結(jié)合物，與已結(jié)合到孔上的HIV核心抗原和／或抗體結(jié)合，如樣品中沒有核心抗原和／或特異性抗體，酶結(jié)合物就不能結(jié)合到孔上。
洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物后，孔中加入3，3"，5，5"-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化氫溶液，結(jié)合有酶結(jié)合物的孔呈現(xiàn)藍(lán)綠色，當(dāng)加入硫酸終止反應(yīng)后而呈橙色，可通過酶標(biāo)儀在450nm波長下讀數(shù)。
試劑
試劑描述、制備和建議的保存條件
亦見警告和注意事項
除非特別說明，所有組分都必須在2-8℃保存。在此條件下，直到效期試劑都能保持其良好的活性。
1．包被板
1塊（GE41/7G79-01）或5塊（GE42/7G79-02）包被HIV抗原和單克隆抗體的96孔板。
使用前，應(yīng)先將反應(yīng)板放置室溫后，再取出所用板條。
未使用的板條的放入密封袋中2—8℃保存。
2．樣品稀釋液
1瓶裝量為18ml的綠色溶液，含緩沖液、牛和鼠的蛋白、皂甙、去污劑和0.05％ ProClin 300保護劑。
3．酶結(jié)合物
1瓶（GE41/7G79-01）或3瓶（GE42/7G79-02）含1.1ml辣根過氧化酶標(biāo)記HIV抗原或單克隆抗體的凍干粉，重溶后每瓶可供2塊板使用。
4．酶結(jié)合物稀釋液
1瓶（GE41/7G79-01）或3瓶（GE42/7G79-02）裝量為22m1的黃色溶液，含緩沖液、牛蛋白、皂甙、去污劑和O.05％ ProClin 300保護劑。
酶結(jié)合物的重溶
輕拍裝有酶結(jié)合物干粉的瓶子，將附著在橡膠塞上的凍干粉拍落，然后將整瓶的酶結(jié)合物稀釋液倒入瓶中，蓋上瓶蓋，將瓶子輕輕顛倒幾次混勻，至少放置30分鐘使其溶解，每隔一段時間將瓶子旋轉(zhuǎn)一下。酶結(jié)合物重溶后呈紅色，如有必要，可將其重新倒回裝酶稀釋液的瓶中重溶后的酶結(jié)合物在2－8℃長可保存4周。
5.抗－HIV-1陽性對照
1瓶經(jīng)化學(xué)滅活的含有HIV-1抗體的人血清，裝量為1.7ml（緩沖液中有牛白蛋白），該血清HBsAg和HCV抗體陰性，含0.05％ Bronidox保護劑。
6.抗－HIV-2陽性對照
1瓶經(jīng)化學(xué)滅活的含有HIV-2抗體的人血清，裝量為1.7ml（緩沖液中有牛白蛋白），該血清HBsAg和HCV抗體陰性，含0.05％ Bronidox保護劑。
7.HIV-1 p24陽性對照
1瓶經(jīng)滅活的p24（人源細(xì)胞培養(yǎng)物），裝量為1.7ml（緩沖液中有牛白蛋白）。
8.陰性對照
1瓶（GE41/7G79-01）或2瓶（GE42/7G79-02）正常人血清，裝量為2.5ml，與HBsAg、HIV-1抗體、HIV-2抗體、HCV抗體和HTLV抗體陰性，含0.05％ Bronidox保護劑。
9.底物稀釋液
1瓶含檸檬酸三鈉和過氧化氫的無色溶液，裝量為35ml。
10.底物濃縮液
1瓶含3，3’，5，5’－四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和穩(wěn)定劑的橙色溶液，裝量為35ml。
底物液
配制底物液時，取一個潔凈的玻璃容器或新的聚苯乙烯瓶，將一定體積的無色底物稀釋液加入等體積的橙色底物濃縮液中，稀釋后溶液呈淺黃色。
必須按照如上配液順序且配制底物液時所用的移液器及玻璃器皿必須干凈。另外，還可以將整瓶底物稀釋液倒入底物濃縮濃液瓶中來配制底物液。1瓶底物液的量足夠5塊板使用，見表1:
表1 所需底物濃縮液和底物稀釋液的體積

若使用自動化系統(tǒng)所需要的底物液可能會多一些，底物液須避光保存。底物液應(yīng)是淺黃色的；如果在使用前已是綠色，表明試劑失效，需棄掉重新配制。
配好的底物液可與其它Murex使用橙色底物濃縮液的試劑盒中的底物液互換使用，但要確保底物液是經(jīng)底物濃縮液和底物稀釋液共同配制的。
配好的底物液2－8℃穩(wěn)定，在15－25℃可穩(wěn)定2天，如果有結(jié)晶必須棄掉。
1.1.洗液
含0.2％ Bronidox保護劑的1瓶（GE41/7G79-01）或2瓶（GE42/7G79-02）含125ml，20倍工作濃度的甘氨酸/硼酸鹽洗液。
根據(jù)需用量將濃縮洗液用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋或?qū)⒄繚饪s洗液稀釋到2500ml，稀釋后的洗液中含0.01％ Bronidox保護劑。
稀釋好的洗液可與其它Murex試劑盒中的甘氨酸／硼酸鹽洗液互換使用，但要確認(rèn)洗液裝量及配制時準(zhǔn)確稀釋。
洗液放入密封容器中，室溫條件下保存1個月，其活性不變。
注:洗液在存放過程中，可能會顯淺黃色，但不影響試驗結(jié)果。
注:盡管底物液和洗液可與其它Murex試劑盒中的同種液體互換使用，但若該成份已過效期時，不能使用。
警告和注意事項
此試劑只適用于體外診斷，僅供專業(yè)人員使用。請參照生產(chǎn)商提供的安全數(shù)據(jù)表和有潛在危險成份上的標(biāo)志。
健康和安全信息
注意:此試劑盒含人源物質(zhì)，沒有一種方法能*保證人源的產(chǎn)品不傳播感染。因此，所有的人源物質(zhì)都應(yīng)以潛在感染物質(zhì)對待。試劑和試驗樣品都應(yīng)按試驗室工作規(guī)范操作。陰性對照血清經(jīng)HBsAg、HIV抗體、HCV抗體和HTLV抗體篩查陰性。
抗－HIV-1和抗－HIV-2陽性對照、HIV-1 p24陽性對照雖經(jīng)滅活，但操作時仍應(yīng)注意。
1.非一次性使用的器具在使用后必須消毒，方法是121℃高壓滅菌1小時；一次性使用的物質(zhì)應(yīng)高壓或焚燒。
2.溢出的有潛在感染的物質(zhì)必須及時用吸水紙擦掉，污染區(qū)域用1.0％次氯酸鈉消毒處理。如果是酸性溢出物，必須先將污染區(qū)域擦干，否則不能使用次氯酸鈉消毒。用于清潔溢出物的物質(zhì)如手套，應(yīng)作為有潛在生物污染的廢棄物處理。不要將含次氯酸鈉的物質(zhì)高壓滅菌。
3.已中和的酸和其它廢液通過加入足夠量的次氯酸鈉使其終濃度為1.0％，并在該濃度的次氯酸鈉中處理30分鐘以達(dá)到有效消毒。
4.不要用嘴吸樣。處理樣品或試驗時，應(yīng)戴一次性手套和防護鏡。試驗結(jié)束后，要*洗手。
5.下列試劑中含有低濃度有害或刺激性物質(zhì):
a）酶結(jié)合物和樣品稀釋液中含ProClin 300，是一種能通過皮膚吸收的致敏劑。
如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量水對接觸區(qū)域進行清洗。
6.用于終止液的硫酸和用于清洗玻璃器皿的鹽酸都是極有腐蝕性的物質(zhì)，使用時一定要小心。如果接觸到皮膚和眼睛，應(yīng)用大量水沖洗。
分析注意事項
1.不要使用過期試劑，避免微生物對試劑的污染而影響試劑的效期和試驗結(jié)果。
2.不要修改試驗步驟，不要用其它廠家生產(chǎn)的或其它批號試劑作為替代品，不要縮短孵育時間。
3.將所有的樣品和試劑放至室溫后使用。用完后，立即放回推薦的保存溫度。
4.所有用過試劑的玻璃器皿都必須用2M鹽酸*清洗，然后用蒸餾水或去離子水沖洗。
5.避免用自動除霜冰箱來放置試劑和樣品。
6.在試驗和保存過程中，避免試劑暴露于強光下或接觸次氯酸氣體。
7.在試驗過程中避免反應(yīng)孔變干。
8.操作要謹(jǐn)慎，避免試劑交叉污染，用來加酶結(jié)合物和底物液移液器必須分開。
9.操作要謹(jǐn)慎，避免酶結(jié)合物接觸或濺到孔的邊緣。加樣時，避免產(chǎn)生氣泡，如有氣泡，可用倒吸的方法將氣泡吸去。
10.確保反應(yīng)板底部清潔干燥，并且在讀板時，液體表面沒有氣泡。
11.防止一次性手套的粉塵對反應(yīng)板的污染。
不要使用CO₂培養(yǎng)箱孵育
12.當(dāng)使用自動化儀器進行測試時，可以不封板和拍干板條。
13.要確保自動化儀器的溶液不污染樣品或試劑。
14.試驗過程中可將溫度控制在37±1℃，以得到滿意的試驗結(jié)果。
15.不要將終止液保存淺盤子中或使用完后倒回瓶中。
樣品的采集、運輸和保存
樣品的采集
血清、含EDTA或檸檬酸的血漿樣品均可使用。靜脈采血的樣品應(yīng)使其自然凝結(jié)，應(yīng)確保血樣*凝結(jié)。任何肉眼可見的物質(zhì)需離心去除。
樣品的運輸和保存
樣品在2～8℃保存。如果72小時內(nèi)不檢測，樣品應(yīng)從凝結(jié)物或細(xì)胞沉淀中分離出并在－15℃或以下冷凍保存，避免樣品的反復(fù)凍融。
操作程序
未提供的必需材料
1.終止液（0.5－2.0M硫酸）:加5.5－11ml分析純濃硫酸到大約80ml蒸餾水或去離子水中，混勻后加水補足100ml。另外，code7212－01使用1N硫酸。
2.新鮮的蒸餾水或去離子水:用于稀釋洗液、配制終止液或自動洗板機清洗。
3.多孔道微量移液器，吸液體積在25－20ul。
4.微量移液器:吸液體積在50－1000ul。
5.能維持37±1℃的水浴箱或孵箱。
6.加熱塊:用在孵箱中，加熱塊好一直放在孵箱內(nèi)。如果不能，好在孵箱內(nèi)放4小時后再進行試驗。
7.儀器
a）微孔板洗板機（自動或手動）
b）酶標(biāo)儀
或
c）全自動儀器
所有儀器必須驗證后使用。
請與Murex公司代表聯(lián)系有關(guān)程序、系統(tǒng)、軟件及驗證方案的詳細(xì)情況。
8.一次性試劑槽（Code No. RT01／5F24）
9消毒用的次氯酸鈉
試驗步驟
請于試驗前仔細(xì)閱讀分析注意事項。返回頂部↑