詳細介紹
英文名稱:Diagnostic Kit for Human Enterovirus viral RNA(Fluorescence PCR)
產(chǎn)品特點:
本試劑用于對咽試子、肛試子樣本中腸道病毒病毒RNA進行定性檢測,用于腸道病毒感染的輔助診斷及流行病學監(jiān)控。
【檢驗原理】根據(jù)熒光PCR技術原理,針對腸道病毒病毒基因設計特異性引物和Taqman探針,通過熒光PCR檢測儀進行檢測,從而實現(xiàn)對腸道病毒病毒RNA的定性檢測。
該系列的熒光PCR法檢測試劑盒內(nèi)包含滿足48人份檢測所需要的試劑,同常規(guī)RT-PCR檢測方法相比,該檢測試劑盒具有以下的優(yōu)點:
1、無需電泳分析PCR終末產(chǎn)物;
2、在PCR擴增過程中實時檢測核酸的擴增;
3、具有快速、簡便、敏感和特異的優(yōu)點;
4、可以防止因打開PCR產(chǎn)物污染樣品的風險。
試驗方法:
取200μl咽試子(肛試子)樣本進行核酸提取。采用北京金豪制藥股份有限公司的核酸分離試劑盒 (硅膠膜吸附法),該試劑盒可用于對腸道病毒樣本中的病毒RNA提取,并按試劑盒說明書要求操作。
本品中的陰性、陽性對照參與核酸提取。
2. PCR擴增:
2.1 實驗設計:
2.1.1待檢樣本檢測:每份樣本使用腸道病毒反應液進行檢測,根據(jù)腸道病毒反應液的檢測結果對樣本進行判定。
2.1.2對照品檢測:每次試驗都應設置陰性對照和陽性對照。
2.2反應體系的配制:
2.2.1準備工作:將腸道病毒反應液融化后振蕩混勻,離心6000rpm 10秒。
2.2.2 反應體系配制:取1個1.5ml 無核酸酶離心管,計算待測樣本數(shù)量(n),取20μl×(n+2)腸道病毒反應液、1μl×(n+2)DNA聚合酶和0.35μl×(n+2)逆轉錄酶充分混勻,離心6000rpm 10秒。
n+2=n份樣本+1份陽性對照+1份陰性對照;
2.3反應體系分管:
每份待測樣本設置1個PCR擴增管,分別將每種反應體系按20μl/管分裝至對應的PCR擴增管中。
2.4加樣:
取5μl(待測樣本RNA、陰性對照、陽性對照)分別加入1個PCR擴增管。
2.5擴增檢測:
將加樣后的PCR擴增管分別轉移到全自動熒光定量PCR檢測儀上進行擴增檢測,不同儀器的設置詳見說明書
結果的解釋、產(chǎn)品性能指標:
4.1陰性對照無Ct值或Ct值為0。
4.2 陽性對照Ct值小于30.0。
【參考值(參考范圍)】
Ct值≤37.0報告該反應陽性;無Ct值或Ct值為0報告該反應陰性;
37.0<Ct值<40.0為灰區(qū)。
規(guī)格、有效期:
【儲存條件及有效期】-20℃冷凍保存,有效期暫定6個月,陽性對照反復凍融次數(shù)不得超過5次。
【適用儀器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自動熒光PCR檢測儀。
【樣本要求】
1. 樣本類型:咽試子、肛試子。