尿碘快速定量檢測試劑盒

[[鄂藥管械（準）字2004第2400710號]

【原理】

尿碘檢測采用碘催化砷鈰反應的原理,使用指示劑指示反應終點,根據(jù)尿碘含量與反應時間成冪函數(shù)的定量關(guān)系計算尿碘濃度。

【技術(shù)性能指標】

1 試劑盒的的檢出下限為6μg／L;

2 相對誤差小于10%;

3 批間變異系數(shù)小于5%。

【試劑盒組成及效期】

1 消解液，用于消解尿樣；

2 還原劑，參與催化反應；

3 指示劑，指示催化反應終點；

4 氧化劑，參與催化反應；

5 系列碘標準液5瓶，50－400 μg／L。碘標準液含特定基質(zhì)。尿樣參考物質(zhì)（供選擇）。

6 2-8℃下貯存，有效期為6個月。

【實驗準備】

1 在2－8℃下貯存的試劑盒使用前需在室溫下平衡30分鐘，消解液稀釋后直接使用。

2 用戶自備器材：①15×（120－150）mm試管若干；②秒表一塊，精度0.01秒；③加樣器200μl、500μl，1000μl各一支；④電熱干燥箱（或恒溫消解儀）。

3 消解液為固體包裝，使用前用水溶解，充分混勻。不同規(guī)格的試劑盒加水量如下表：

【操作步驟】（標準曲線的制備與樣品的測定）

1 使用加樣器準確移取50，100，200，300，和400μg/L的系列碘標準溶液和尿樣各0.2ml于試管中，各加1.0ml消解液，在干燥箱（或恒溫消解儀）中于105℃（消解溫度改為105℃，提請用戶注意）下加熱1小時消解。取出試管，冷至室溫，每管加入1.0ml還原劑，搖勻。每管加入0.5ml指示劑，搖勻。注意：指示劑在溶液中時間過長易鈍化，一次加入的管數(shù)不要過多，以20管為宜。

2 準備好秒表、記錄本和一張白紙，以下單管操作。選定一管，一手用加樣器快速加入0.5ml氧化劑，另一手同時啟動秒表計時，立即放下加樣器，取出該試管搖勻，此時試液變?yōu)樗{色。以白紙為背景，觀察試管內(nèi)顏色的變化。隨著反應的進行，試液將從藍色變?yōu)樗{紫色zui后變?yōu)榧t色。藍色是反應進行色，時間較長。藍紫色是反應接近終點色，持續(xù)時間較短。紅色是反應完成色，穩(wěn)定。當試液變?yōu)樗{紫色且剛出現(xiàn)紅色時（突變點）停止秒表，記錄反應時間（秒）。突變點的確定根據(jù)操作者的觀察習慣，只要一致即可。重復上面操作，測定其余樣品管。操作步驟如下表所示。

操作步驟簡略表

【尿碘含量的計算】

反應時間S（秒）的對數(shù)值lnS或lgS與碘濃度 C（μg/L）的對數(shù)值lnC（或lgC）成線性關(guān)系：lnC=a+blnS （或lgC=a+blgS）。使用計算機的客戶可按本公司免費提供的計算程序計算，推薦使用。計算程序從本公司網(wǎng)站下載，http://www.whzssh.com。若使用函數(shù)計算器，按下述方法計算。舉例如下：

17℃下測得一組數(shù)據(jù)如下：

以CASIO（卡西歐）3600型計算器為例，操作如下：

開啟回歸模式：MODE 2，INV AC，求標準曲線反應時間與標準溶液濃度的回歸方程。

輸入數(shù)據(jù)：78.03ln（log） xD,yD50ln（log）DATA；

┇

20.93ln（log） xD,yD400ln（log）DATA。

標準曲線的相關(guān)系數(shù)r值：INV 9；（－0.9995） 　 b值：INV 8；（－1.571）　　a值：INV 7（10.759）。

樣品濃度的計算，樣1：45.96ln（log） y xINVln（log），得出 115.1μg/L。

同理得出樣2的測定結(jié)果為200.1μg/L。

注意：INV鍵在有些計算器上標為SHIFT，二者功能相同。

【尿樣的收集及保存】

1 尿樣以晨尿為優(yōu);隨意一次尿樣也可（使用隨意尿樣如檢測為缺碘需復查確正）；

2取排尿過程中的中段尿樣至少10ml,取其2ml分裝在血清離心管中便于保存,用于測定。

3 被測者在留取尿樣的前一天不得食用海帶紫菜等高碘食品和含碘藥品，也不得為排尿而故意飲水。

4 尿樣常溫保存為7天，2-8℃下為1個月，不提倡冷凍保存。

【檢測注意事項】

1 尿碘測定屬超微量分析，測定場所不得放置高碘物品如碘酒、碘鹽等；測定所用器材應清洗干凈。

2 溫度影響反應速度。在加入氧化劑后的計時測定過程中，需在恒溫條件下進行，避免空氣流動過大和陽光直射。如室溫不恒定，可將試管置于室溫水浴中測定，以減少溫度對測定結(jié)果的影響。適宜測定的室溫范圍為15－25℃。當氣溫大于25℃時，反應速度可能過快，可將指示劑用去離子水適當稀釋，稀釋比例為：水：指示劑＝1：5，體積比，以降低反應速度，便于操作。

3 曲線回歸方程的相關(guān)系數(shù)的值達0.995以上時，才能保證測定的準確度。

4 因0的對數(shù)無意義，故標準曲線不設(shè)0管。本方法的檢測靈敏度為6μg/L ，小于50μg/L的尿碘濃度可通過曲線外推求得。

5 反應終點的觀察是本實驗的關(guān)鍵，只能一人操作。

6 電熱干燥器（烤箱）在使用之前應擦洗干凈，防止鐵銹和灰塵污染樣品。加熱時注意不要堵塞恒溫干燥箱頂部的通風口，保持與外界壓力的一致。

7 試劑啟封后應將封口鋁箔撕扯干凈，防止鋁箔外層鋁與試劑反應，造成試劑失效。

8 使用全塑加樣器加取試劑和樣品。不得使用金屬桿加樣器，不提倡使用玻璃吸管。

9加樣器吸頭出現(xiàn)掛水珠現(xiàn)象應及時更換。

10 試劑中還原劑有一定毒性，不慎濺入口鼻時請盡快用水沖洗。

【尿碘水平參考值】

以尿碘水平為指標，我國現(xiàn)行的標準是：人體zui適宜的碘含量水平是100-400μg/L。人體對碘的安全耐受量是1000μg/L。不同人群缺碘的判斷標準如下：

【包裝單位】

120管（60ml×6瓶）約測定100人份；

70管（70ml×2瓶，35ml×2瓶）約測定50人份；