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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：區(qū)域特異性誘變實(shí)驗(yàn)

標(biāo)簽：區(qū)域特異性誘變可在長達(dá)3‘的克隆化DN段上產(chǎn)生大量的隨機(jī)分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個可用來分離單鏈DNA的載體后，用各種可造成特定堿基損傷的化學(xué)試劑處理。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)材料DNA試劑、試劑盒乙酸鈉亞硝酸鈉TE無水乙醇dNTP反轉(zhuǎn)錄酶RNA酶洗脫液溴化乙錠儀器、耗材水浴鍋培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.用限制性內(nèi)切核酸酶消化DNA以獲得目的DN段，將靶片段雙向克隆到M13噬菌體載體或含有M13復(fù)制起始子的質(zhì)粒載體中。從100ml感染細(xì)抱培養(yǎng)物中提取單鏈DNA。2.在三個微量離心管內(nèi)各加
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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：SNP實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

一、原理SNP（SingleNucleotidePolymorphism）即單核苷酸多態(tài)性，是由于單個核苷酸改變而導(dǎo)致的核酸序列多態(tài)性（Polymorphism）。據(jù)估計(jì)，在人類基因組中，大約每千個堿基中有一個SNP，無論是比較于限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析還是微衛(wèi)星標(biāo)記（STR），都要廣泛得多。SNP是我們考察遺傳變異的zui小單位,據(jù)估計(jì)，人類的所有群體中大約存在一千萬個SNP位點(diǎn)。一般認(rèn)為，相鄰的SNPs傾向于一起遺傳給后代。于是，我們把位于染色體上某一區(qū)域的一組相關(guān)聯(lián)的SNP等位
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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：甲醛變性電泳檢測RNA完整性

一、材料、試劑和儀器1、材料：植物總RNA5-10μg2、試劑：1）加樣運(yùn)載緩沖液（Loadingbuffer）50%甘油1mmol/LEDTA（pH8.0）0.25%溴酚藍(lán)25%二甲苯氰FF2）10×TAEBuffer3）5×甲醛凝膠電泳緩沖液：0.1mol/LMOPs（pH7.0）40mmol/L乙酸鈉5mmol/LDETA（pH8.0）4）甲醛，甲酰胺3、儀器：電泳裝置，紫外透射觀測儀二、實(shí)驗(yàn)程序1、甲醛變性的瓊脂糖（Agarose）凝膠的配制在250mL的錐形瓶中準(zhǔn)確稱量2gAgaros
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27 2013年 07月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)

多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)標(biāo)簽：抗藥基因多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)是通過反轉(zhuǎn)錄和PCR的方法來檢測特定基因的過度表達(dá)。實(shí)驗(yàn)方法PCR擴(kuò)增法實(shí)驗(yàn)方法原理大多MDR細(xì)胞膜上出現(xiàn)MDR-1基因及其基因產(chǎn)物P-糖蛋白過度表達(dá)。實(shí)驗(yàn)材料RNA試劑、試劑盒PBS氯仿異丙醇萘酸異硫氰酸肽十二烷基肌酸鈉構(gòu)櫞酸鈉乙酸鈉二疏基乙醇乙醇Taq酶儀器、耗材離心機(jī)紫外分光光度計(jì)瓊脂糖凝膠電泳PCR儀實(shí)驗(yàn)步驟一、細(xì)胞總RNA提取1.收集約5×107個細(xì)胞，冷PBS洗滌。2.加入400ulRNA提取液（含6mol/l的異硫氰酸肽，0
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27 2013年 07月: DNA專題：質(zhì)粒DNA提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測

一、堿變性法提取質(zhì)粒DNA質(zhì)粒（Plasmid）是細(xì)菌染色體外能自身獨(dú)立復(fù)制的雙股環(huán)狀DNA。帶有遺傳信息，可賦予細(xì)菌某些新的表型。將質(zhì)粒指紋圖譜分析方法、質(zhì)粒DNA探針技術(shù)及檢測質(zhì)粒的PCR技術(shù)用于臨床感染性疾病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查已成為現(xiàn)實(shí)。質(zhì)粒作為載體在基因工程中起著重要的作用。分離和純化質(zhì)粒DNA的方法很多，但這些方法基本包括三個步驟：即細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒DNA的擴(kuò)增，細(xì)菌菌體的裂解；質(zhì)粒DNA的提取與純化。本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)用堿變性方法提取質(zhì)粒DNA。原理細(xì)菌培養(yǎng)物加入SDS和NaOH堿性溶液處
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27 2013年 07月: DNA專題：真核細(xì)胞基因組提取

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘案叩葎游铮叩戎参锏幕蚪M相當(dāng)龐大，如人類細(xì)胞基因組由30億個堿基對組成，果蠅基因組有1.4×108個堿基對，水稻基因組有1.4×109個堿基對。真核細(xì)胞基因組中，約1萬－1.5萬個可表達(dá)的結(jié)構(gòu)基因，其它大量存在的是調(diào)控序列和內(nèi)含子序列?？梢哉f某特定物種的基因組，包含了該物種生長，發(fā)育，繁殖等各項(xiàng)生理活動的幾乎全部信息量，因而對真核細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)，組成，以及表達(dá)調(diào)控的研究是至關(guān)重要的，而研究的起點(diǎn)就是要獲得純度高--不含蛋白質(zhì)、糖類、酚、氯仿等污染；得率好--以便有足夠量用于
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22 2013年 07月: DNA專題：DNA定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)

本文先講zui簡單的一個點(diǎn)的定點(diǎn)突變技術(shù)，其它較長片段的突變，刪除，插入技術(shù)以后會慢慢奉上：在做實(shí)驗(yàn)之前，我們首先要搞清楚實(shí)驗(yàn)的目的和實(shí)驗(yàn)的原理。實(shí)驗(yàn)的目的應(yīng)該比較明確吧：就是要把自己的基因上面的一個堿基換成另外一個堿基。一般情況下我們會有幾種可能使我們需要這樣去做：*我們吊出來的基因有點(diǎn)突變，相信這可能是大家經(jīng)常會遇到的問題?；蚝貌蝗菀椎醭鰜?，并裝進(jìn)了自己的載體，卻發(fā)現(xiàn)有一兩個堿基跟自己的預(yù)期序列或所有的公共數(shù)據(jù)庫不匹配，然后暴昏。大家實(shí)驗(yàn)室里面還是用Taq酶為主吧，Pfu這樣的高保真酶大家
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22 2013年 07月: DNA專題：血基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)

血基因組DNA提取可以：（1）從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞、病毒和線粒體中提取DNA；（2）用于后續(xù)測序、遺傳信息學(xué)等研究。實(shí)驗(yàn)方法血基因組DNA試劑盒提取法血基因組DNA大量試劑盒提取法血基因組DNA中量試劑盒提取法實(shí)驗(yàn)方法原理本試劑盒采用特殊的細(xì)胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K裂解）從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血、血漿、血清、骨髓、其他體液、淋巴細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞、病毒和線粒體中提取DNA。實(shí)驗(yàn)材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA試劑盒儀器、耗材96孔
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