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04
2013年
09月 -
目前市場上幾種代表性的核酸染料：GelRed是一款集高靈敏度、低毒性和光穩(wěn)定性于一體的核酸凝膠染料。由于染料分子不能透過人體細胞膜，保證了實驗環(huán)境的安全與潔凈。該產(chǎn)品已通過美國環(huán)保局安全認定，廢棄物可直接倒入下水道，不會造成任何環(huán)境污染。EB（溴化乙啶）是早期分子實驗中常用的小分子核酸凝膠染色劑，但染色效果并不靈敏，背景熒光信號太強，分辨率不高。zui重要的EB是一種高誘變性致癌的化學(xué)物質(zhì)。SYBRGreenI和SYBRGold也被廠家宣傳為靈敏的凝膠染色試劑。但SYBRGreenI尤其是SYB【查看全文】
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2013年
09月 -
生物素酰化探針的檢測實驗標簽：生物素?；结樑c放射性標記探針的比活不同，生物素標記探針的可檢出性在于每千堿基對中摻入的生物素分子的數(shù)量，它可用比色法檢測。實驗方法比色法化學(xué)發(fā)光法實驗材料DNA試劑、試劑盒磷酸酶緩沖液封阻液牛血清蛋白TENBT儀器、耗材離心機分光光度計搖床實驗步驟1.用DNA稀釋緩沖液，稀釋生物素?；瘶藴蔇NA，濃度為0、1、2、5、10和20pg/μl。以同樣稀釋液處理待測DNA。2.對干硝酸纖維素濾膜：每個稀釋度取1μl點膜，在80℃供干約1h接步驟4。3.對于足龍膜：每個稀【查看全文】
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2013年
09月 -
標簽：生物素酰化探針在標準的切口平移實驗體系中，生物素-11-dNTP取代了dNTP，DNA酶I的濃度調(diào)整到可生成長100~500個核苷酸的范圍，其他生物素?；暮塑账嵋部纱嫔锼?11-dNTP。實驗方法切口平移法隨即寡核苷酸引物合成法實驗材料DNA試劑、試劑盒DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素NaClEDTASDS無水乙醇儀器、耗材注射器電泳儀離心機培養(yǎng)箱實驗步驟1.混合以下物質(zhì)于100μl反應(yīng)體積：（1）10μl10×大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ緩沖液（2）10μl0.5mmol/l3d【查看全文】
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04
2013年
09月 -
DNA實驗技術(shù)：聚合酶鏈反應(yīng)構(gòu)建重組DNA
標簽：聚合酶重組DNA利用聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR），任何兩個DNA片段可連接成一個新的重組DNA分子。通過在PCR引物中引入的額外非同源的核苷酸，可在連接處產(chǎn)生所需要的讀碼框架或酶切位點。用該技術(shù)并不需要知道待亞克隆的DNA的核苷酸序列，只需要知道兩小段伸展于片段兩倆的區(qū)段作為擴增反應(yīng)的引物結(jié)合區(qū)。實驗方法基本方案實驗材料DNA試劑、試劑盒TE無水乙醇DNA聚合酶CTP儀器、耗材電泳儀離心機PCR儀實驗步驟1.制備模板DNA，如DNA不是經(jīng)氯化銫梯度純化的，100℃煮沸10min以滅活核酸酶。2【查看全文】
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04
2013年
09月 -
標簽：T4DNA聚合酶T4DNA聚合酶具依賴人為模板的聚合酶活性，同時具有對單鏈、雙鏈DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。實驗方法T4DNA聚合酶實驗材料DNA試劑、試劑盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT儀器、耗材水浴鍋實驗步驟一、50μl反應(yīng)體積：（1）50mmol/lTris·Cl，pH8.0（2）5mmol/lMgCl2（3）5mmol/lDTT（4）100μmol/l4dNTP混合液（5）50μg/mlBSA（6）0.1UT4DNA聚合酶（7）2【查看全文】
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2013年
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1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；2.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30ml）；3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳內(nèi)槽；5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內(nèi)有氣泡，應(yīng)設(shè)法除去；【查看全文】
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2013年
08月 -
DNA實驗技術(shù)：基因轉(zhuǎn)染（磷酸鈣-DNA共沉淀法）磷酸鈣-DNA 共沉淀法
磷酸鈣-DNA共沉淀法核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現(xiàn)時，可使DNA附在細胞表面，利于細胞吞入攝取，或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內(nèi)，進入細胞的DNA僅有1%～5%可以進入細胞核中，其中僅有不到1%的DNA可以與細胞DNA整合，在細胞中進行穩(wěn)定表達，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的頻率大約為10-4，這項技術(shù)能用于任何DNA導(dǎo)入哺乳類動物進行暫時性表達或長期轉(zhuǎn)化的研究。此方法對于貼壁細胞轉(zhuǎn)染是zui常用并的方法。1、配液（1）2×HBS1.63gNaCl1.19gHepes0.023gNa2PO4、2【查看全文】
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2013年
08月 -
DNA實驗技術(shù)：化學(xué)法測定DNA的含量——二苯胺顯色法
（一）原理DNA在酸性條件下加熱，其嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵斷裂，生成嘌呤堿、脫氧核糖和脫氧嘧啶核苷酸，而2-脫氧核糖在酸性環(huán)境中加熱脫水生成ω-羥基-γ-酮基戊糖，與二苯胺試劑反應(yīng)生成藍色物質(zhì)，在595nm波長處有zui大吸收。DNA在40-400μg范圍內(nèi)，光吸收與DNA的濃度成正比。在反應(yīng)液中加入少量乙醛，可以提高反應(yīng)靈敏度。（二）試劑及器材1.DNA標準溶液準確稱取小牛胸腺的DNA鈉鹽，以0.01mol/LNaOH溶液配成200μg/mL的溶液。2.測定樣品溶液準確稱取干燥的DNA制品【查看全文】
