Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR

 (gDNA digester plus)

—— Yeasen第三代逆轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液，高質(zhì)量cDNA的*！

研發(fā)背景

RT-qPCR是一個(gè)多步驟連貫實(shí)驗(yàn)，逆轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能通過后續(xù)qPCR進(jìn)行判定，因此這一過程的成功與否十分關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)過程中，你是否有遇到過這些問題？

1.逆轉(zhuǎn)錄效率低導(dǎo)致后續(xù)qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值偏大？

2.RNA具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或GC含量高導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄失敗？

3.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品組分多，加樣麻煩誤差還大？

。。。。。。

Hifair^® Ⅲ SuperMix，讓逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)更方便、更！

Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)是基于翊圣Hifair^® Ⅲ Reverse Transcriptase而開發(fā)的即用型預(yù)混液。該產(chǎn)品可耐受高達(dá)65℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄；同時(shí)增強(qiáng)了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。

產(chǎn)品帶基因組DNA去除成分，適用于兩步法RT-qPCR檢測，針對qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化，比例優(yōu)化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始，并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.耐熱性

耐受65℃，適合高GC及具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板

2.逆轉(zhuǎn)錄

相對市面同類產(chǎn)品具有更高的逆轉(zhuǎn)錄效率

3.寬廣的線性檢測范圍

在寬廣模板范圍內(nèi)（Total RNA 10pg-5μg）均可合成cDNA

4.去除基因組殘留

試劑盒自帶組分可去除殘留基因組，且無需額外失活操作

5.模板投入量

RNA投入量多可加12μL，有利于低濃度模板檢測

6.操作簡便性

基因組DNA去除與逆轉(zhuǎn)錄均設(shè)置成mix形式，加樣方便，移液誤差小

7.反應(yīng)時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄時(shí)間15min，反應(yīng)總時(shí)間低于半小時(shí)

產(chǎn)品應(yīng)用

兩步法RT- qPCR檢測。

產(chǎn)品性能

1.反應(yīng)溫度55℃，耐受65℃高溫

反應(yīng)溫度55℃可滿足常規(guī)模板及二級結(jié)構(gòu)模板的逆轉(zhuǎn)錄，高GC模板可適當(dāng)提高到65℃反應(yīng)

2.出色的逆轉(zhuǎn)錄效率，適合不同GC含量、不同表達(dá)豐度的基因

針對不同GC含量、不同表達(dá)豐度的基因，Hifair^® Ⅲ SuperMix相對市面同類產(chǎn)品具有

更高的逆轉(zhuǎn)錄效率

3.寬廣的模板線性范圍內(nèi)均可合成cDNA

Hifair^® Ⅲ SuperMix在很寬的模板范圍內(nèi)均可合成cDNA。Total RNA投入量為5pg-5μg，逆轉(zhuǎn)錄按說明書標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行，所得cDNA進(jìn)行qPCR檢測。

GAPDH：E=98.47%，R²=0.998；RPS2：E=98.79%，R²=0.998；

AGTPBP1：E=100.08%，R²=0.998；GLUD1：E=100.35%，R²=0.998。

4.去除基因組殘留

僅使用試劑盒自帶的gDNA digester Mix就可以去除RNA模板中殘留基因組，且無需失活操作，Hifair^® Ⅲ SuperMix可充分抑制gDNA digester活性。

Positive control：25ng Mus gDNA作為模板進(jìn)行qPCR檢測。

實(shí)驗(yàn)1：25ng Mus gDNA，按說明書標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行g(shù)DNA去除后逆轉(zhuǎn)錄，所得產(chǎn)物進(jìn)行qPCR檢測。

實(shí)驗(yàn)2：25ng Mus gDNA，同時(shí)加入gDNA digester Mix和Hifair® Ⅲ SuperMix處理，按說明書程序逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行qPCR檢測。

5.RNA大投入12μL，有利于低濃度模板檢測

客戶使用情況

產(chǎn)品上市以來，短短一個(gè)月內(nèi)已得到廣大用戶認(rèn)可— 使用客戶數(shù)量300+

主要有：中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院，北京大學(xué)，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，清華大學(xué)，華東理工大學(xué)，上海交通大學(xué)，復(fù)旦大學(xué)，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，浙江大學(xué)，中國藥科大學(xué)，武漢大學(xué)，中山大學(xué)，東南大學(xué)，南京林業(yè)大學(xué)，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，南方醫(yī)科大學(xué)，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國水稻研究所，中國科學(xué)院水生生物研究所，暨南大學(xué)，中科院健康科學(xué)研究所，中國科學(xué)院動(dòng)物研究所，華東師范大學(xué)，同濟(jì)大學(xué)，中國科學(xué)院微生物研究所，第二軍醫(yī)大學(xué)，上海市東方醫(yī)院，上海植物逆境生物學(xué)研究中心，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，中國科學(xué)院植物研究所，中國科學(xué)院南京土壤研究所，中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所，中國科學(xué)院生物物理研究所，中國科學(xué)院南海海洋研究所，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院等單位的課題組。

常見問答

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix后續(xù)只能用于qPCR實(shí)驗(yàn)嗎？

A：推薦用于qPCR實(shí)驗(yàn)，常規(guī)長度基因克隆實(shí)驗(yàn)也可以用。

Q：為什么說Hifair^® Ⅲ SuperMix操作誤差更小，重復(fù)性更好？

A：Hifair^® Ⅲ SuperMix只有3個(gè)組分，且每個(gè)組分的添加體積均超過1μL，因此移液誤差更小，重復(fù)性更好。

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的溫度應(yīng)設(shè)置為多少？

A：常規(guī)模板55℃即可，如果是具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板或高GC含量的模板，可將溫度適當(dāng)提高至65℃，有利于提高逆轉(zhuǎn)錄效率。

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix操作時(shí)可以不進(jìn)行g(shù)DNA去除這一步嗎？

A：可以省略。

Q：為什么Hifair® Ⅲ SuperMix更有利于低濃度模板檢測？

A：一是該產(chǎn)品增強(qiáng)了與模板的親和力，二是由于組分的設(shè)置，使得RNA大投入量可以達(dá)到12μL，對于低濃度模板可通過增大投入體積來增大模板投入量。

YEASEN逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品部分已發(fā)表文獻(xiàn)

1. Wang J, Ge P, Qiang L, et al. The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nature communications, 2017, 8(1): 244. [ IF 12.353]

2. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano

hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337. [ IF7.082]

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4. Zhu Y, Song D, Xu P, et al. A HD‐ZIP III gene, PtrHB4, is required for interfascicular cambium development in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2018, 16(3): 808-817. [ IF 6.305]

5. Yu S L, Wu J C, Liu P F, et al. Up-regulation of RNF187 induces hepatocellular carcinoma cell epithelial to mesenchymal transitions[J]. Oncotarget, 2017, 8(60): 101876. [ IF 6.18]

6. Yu X, Hu L, Li S, et al. Long non-coding RNA Taurine upregulated gene 1 promotes osteosarcoma cell metastasis by mediating HIF-1α via miR-143-5p[J]. Cell death & disease, 2019, 10(4): 280.[ IF 5.959]

7. He L, Fan X, Li Y, et al. Overexpression of zinc finger protein 384 (ZNF 384), a poor prognostic predictor,

promotes cell growth by upregulating the expression of Cyclin D1 in Hepatocellular carcinoma[J]. Cell death &

disease, 2019, 10(6): 444.[ IF 5.959]

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