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有了它們，細胞凋亡檢測再也不愁
細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是指在一定的生理或者病理條件下，細胞主動的、高度有序的、自己結(jié)束其生命的過程。它在生物體的進化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。凋亡過程中伴隨著細胞膜、蛋白、DNA等各種變化，可通過各種手段檢測，具體介紹如下圖所示：
圖1 細胞凋亡歷程
目前市場上出現(xiàn)多種細胞凋亡周期檢測試劑盒，國外品牌仍占據(jù)著該領(lǐng)域的半壁江山，但價格昂貴、規(guī)格小、物流慢，一定程度上限制科研進程。為了打破這種局面，在國家大力扶持自主品牌的政策下，多家企業(yè)投入研究，研發(fā)出大量價格低廉、性質(zhì)穩(wěn)定的細胞凋亡周期檢測產(chǎn)品，提高了相關(guān)科研、檢測實驗室的效率，降低相應(yīng)成本。
上海翊圣生物公司就是凋亡檢測試劑盒生產(chǎn)廠家之一。不僅長期生產(chǎn)多種高效穩(wěn)定、價格低廉、適用范圍廣的凋亡檢測試劑盒，且整理出一整套完美檢測細胞凋亡的方法，實現(xiàn)了細胞從凋亡早期到晚期的實時監(jiān)測。下面，就讓我們從問題出發(fā)，解讀細胞凋亡的全過程。
如何檢測早期凋亡？
在細胞凋亡早期階段，細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（PS）從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外，暴露在細胞外環(huán)境中，細胞膜通透性增加，從而被PS特異的Annexin-V探針標記。目前YEASEN公司提供的Annexin-V細胞凋亡檢測試劑盒，可適用于早期凋亡檢測。Annexin-V為Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對PS有*的結(jié)合力。另外，本試劑盒中還提供了PI/7-AAD進行雙染色，由于正常細胞不會被染色，凋亡早期細胞可被標記上Annexin-V，壞死或凋亡晚期細胞被PI/7-AAD染色，因此各階段的細胞明顯區(qū)分開來。
圖2 Annexin-V實驗原理
性能展示（修飾一下）
1.不同熒光基團標記Annexin-V探針，可實現(xiàn)多重染色
包括PE、FITC、Alexa Fluor 488等標記Annexin-V，靶向細胞外翻的PS，在不同的激發(fā)和發(fā)射通道下，發(fā)出綠色、紅色不同顏色的熒光信號，可與細胞核等探針聯(lián)合使用，實現(xiàn)細胞多重染色。
圖3a Annexin-V-Fluor647 (紅色)染色細胞，來源：參考文獻
圖3b Annexin-V-FITC (綠色)染色細胞，來源：參考文獻
2.Annexin-V探針靈敏度高、特異性強
納摩爾濃度水平、可高選擇性地識別和標記凋亡早期外翻的PS，不會標記其他DNA、RNA，檢測出極少量的凋亡細胞。
3.背景干擾少、穩(wěn)定性強
不會出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。
4.翊圣Annexin-V探針與進口產(chǎn)品比較，價格低廉
相同規(guī)格條件，比較翊圣與T*進口Annexin-V探針價格差異。
圖4 YEASEN和T*進口的Annexin-FITC產(chǎn)品價格對比圖（規(guī)格：50 T）
除此之外，細胞凋亡早期，線粒體跨膜電位的下降，導(dǎo)致膜穿透性改變。JC-1染料可以檢測線粒體跨膜電位的變化，正常線粒體內(nèi)，JC-1發(fā)出強烈的紅色熒光。凋亡早期的線粒體內(nèi)，由于膜電位的下降或喪失，JC-1產(chǎn)生綠色熒光。通過其熒光的增強或減弱可反應(yīng)線粒體內(nèi)膜電負性的增高或降低。
如何檢測晚期凋亡？
細胞凋亡晚期， 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標記的dUTP結(jié)合到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法就是TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。目前YEASEN公司提供的TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒，可適用于晚期凋亡檢測。
圖5 TUNEL實驗原理
性能展示（修飾一下）
1.TUNEL探針可檢測石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細胞和從組織中分離的細胞不同樣本
不同熒光顏色TUNEL試劑盒，可標記細胞、爬片、石蠟切片等不同樣本，發(fā)射不同熒光信號。
圖6a TUNEL-FITC檢測細胞樣本,來源：參考文獻
圖6b TUNEL-Alex488檢測石蠟切片,來源：參考文獻
圖6c TUNEL-Alex640檢測細胞爬片,來源：參考文獻
2.靶向特定的凋亡晚期中的DNA，具有高選擇性和高靈敏度
納摩爾濃度水平的TUNEL探針，高選擇性地靶向和標記晚期凋亡細胞的片段化DNA的粘性3'-OH末端，發(fā)出強烈熒光信號，可檢測出極少量的凋亡細胞。
3.檢測多樣性
流式細胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦、酶標儀等儀器均可以檢測熒光信號。
圖7 不同儀器檢測TUNEL熒光信號值
4.背景干擾少、穩(wěn)定性強
不會出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。
5.翊圣TUNEL探針與進口產(chǎn)品比較，價格低廉
相同規(guī)格條件，比較翊圣與T*進口TUNEL-FITC探針價格差異。
圖8 YEASEN和T*進口的TUNEL-FITC產(chǎn)品價格對比圖（規(guī)格：50 T）
產(chǎn)品選擇指南
目前翊圣擁有10余種早期凋亡和晚期凋亡檢測試劑盒，各具特色，能夠*用戶各種需求。
表1細胞凋亡產(chǎn)品選擇指南
| 早期凋亡檢測試劑盒 | ||||
Annexin V系列產(chǎn)品 | JC-1產(chǎn)品 | ||||
產(chǎn)品名稱 | Annexin V- FITC /PI | Annexin V- PE/7-AAD | Annexin V-Alexa Fluor 647/PI | Annexin V -EGFP /PI | JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒 |
靶標 | 與PS有強親和力結(jié)合，檢測早期凋亡細胞 | 與線粒體結(jié)合，檢測膜電位變化 | |||
標記顏色 | 綠色 | 紅色 | 紅色 | 綠色 | 紅色、綠色 |
Ex/Em(nm) | 488/525 | 546/647 | 651/667 | 488/505 | 585 /590、514 / 529 |
檢測平臺 | 顯微鏡成像、流式細胞儀、酶標儀、共聚焦 | ||||
晚期凋亡檢測試劑盒 | |||||
產(chǎn)品名稱 | TUNEL-FITC | TUNEL -Alexa Fluor 488 | TUNEL -Alexa Fluor 640 | ||
靶標 | 結(jié)合染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂的粘性3'-OH末端，檢測凋亡晚期細胞 | ||||
Ex/Em (nm) | 488/519 | 488/520 | 620/640 | ||
標記顏色 | 綠色 | 綠色 | 紅色 | ||
檢測平臺 | 顯微鏡成像、流式細胞儀、酶標儀、共聚焦 | ||||
訂購信息
表2 2020年翊圣細胞凋亡產(chǎn)品價格
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） | *（元） |
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit | 40302ES/20/50/60 | 20/50/100 T | 480.00/ 960.00/1680.00 | 366.00 /686.00 /986.00 |
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒 Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit | 40310ES20/50/60 | 20/50/100 T | 480.00/960.00/1680.00 | 386.00/786.00 /1346.00 |
Kit JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay | 40706ES60 | 100 T | 800.00 | \ |
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（FITC）TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) | 40306ES20/50/60 | 20/50/100 T | 1178.00/2680.00/4080.00 | \ |
公司介紹
上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd）成立于2009年，是國家高新技術(shù)型企業(yè)，長期專注于分子酶原料及建庫試劑盒等產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)。我們的目標讓下游企業(yè)節(jié)省更多的成本，為中國精///準醫(yī)療的發(fā)展貢獻自己的力量。
上海翊圣生物公司擁有*分子酶雙向技術(shù)平臺、大規(guī)模蛋白發(fā)酵純化技術(shù)平臺、高效抗體篩選技術(shù)平臺，目前已成功開發(fā)各類診斷分子酶、二代測序建庫酶等40余種，并實現(xiàn)工業(yè)放大。翊圣生物開發(fā)的PCR類、NGS類、體外診斷（IVD）和相關(guān)酶原料等產(chǎn)品獲得了廣大客戶的認可。此外，我們還為工業(yè)客戶提供定制化開發(fā)服務(wù)，以滿足個性化需求。
