有了它們，細(xì)胞凋亡檢測再也不愁 

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是指在一定的生理或者病理?xiàng)l件下，細(xì)胞主動(dòng)的、高度有序的、自己結(jié)束其生命的過程。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。凋亡過程中伴隨著細(xì)胞膜、蛋白、DNA等各種變化，可通過各種手段檢測，具體介紹如下圖所示：

圖1 細(xì)胞凋亡歷程

目前市場上出現(xiàn)多種細(xì)胞凋亡周期檢測試劑盒，國外品牌仍占據(jù)著該領(lǐng)域的半壁江山，但價(jià)格昂貴、規(guī)格小、物流慢，一定程度上限制科研進(jìn)程。為了打破這種局面，在國家大力扶持自主品牌的政策下，多家企業(yè)投入研究，研發(fā)出大量價(jià)格低廉、性質(zhì)穩(wěn)定的細(xì)胞凋亡周期檢測產(chǎn)品，提高了相關(guān)科研、檢測實(shí)驗(yàn)室的效率，降低相應(yīng)成本。

上海翊圣生物公司就是凋亡檢測試劑盒生產(chǎn)廠家之一。不僅長期生產(chǎn)多種高效穩(wěn)定、價(jià)格低廉、適用范圍廣的凋亡檢測試劑盒，且整理出一整套完美檢測細(xì)胞凋亡的方法，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞從凋亡早期到晚期的實(shí)時(shí)監(jiān)測。下面，就讓我們從問題出發(fā)，解讀細(xì)胞凋亡的全過程。

如何檢測早期凋亡？

在細(xì)胞凋亡早期階段，細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（PS）從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中，細(xì)胞膜通透性增加，從而被PS特異的Annexin-V探針標(biāo)記。目前YEASEN公司提供的Annexin-V細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，可適用于早期凋亡檢測。Annexin-V為Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)PS有*的結(jié)合力。另外，本試劑盒中還提供了PI/7-AAD進(jìn)行雙染色，由于正常細(xì)胞不會(huì)被染色，凋亡早期細(xì)胞可被標(biāo)記上Annexin-V，壞死或凋亡晚期細(xì)胞被PI/7-AAD染色，因此各階段的細(xì)胞明顯區(qū)分開來。

圖2 Annexin-V實(shí)驗(yàn)原理

性能展示（修飾一下）

1.不同熒光基團(tuán)標(biāo)記Annexin-V探針，可實(shí)現(xiàn)多重染色

包括PE、FITC、Alexa Fluor 488等標(biāo)記Annexin-V，靶向細(xì)胞外翻的PS，在不同的激發(fā)和發(fā)射通道下，發(fā)出綠色、紅色不同顏色的熒光信號(hào)，可與細(xì)胞核等探針聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞多重染色。

圖3a Annexin-V-Fluor647 (紅色)染色細(xì)胞，來源：參考文獻(xiàn)

圖3b Annexin-V-FITC (綠色)染色細(xì)胞，來源：參考文獻(xiàn)

2.Annexin-V探針靈敏度高、特異性強(qiáng)

納摩爾濃度水平、可高選擇性地識(shí)別和標(biāo)記凋亡早期外翻的PS，不會(huì)標(biāo)記其他DNA、RNA，檢測出極少量的凋亡細(xì)胞。

3.背景干擾少、穩(wěn)定性強(qiáng)

不會(huì)出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。

4.翊圣Annexin-V探針與進(jìn)口產(chǎn)品比較，價(jià)格低廉

相同規(guī)格條件，比較翊圣與T*進(jìn)口Annexin-V探針價(jià)格差異。

圖4 YEASEN和T*進(jìn)口的Annexin-FITC產(chǎn)品價(jià)格對(duì)比圖（規(guī)格：50 T）

除此之外，細(xì)胞凋亡早期，線粒體跨膜電位的下降，導(dǎo)致膜穿透性改變。JC-1染料可以檢測線粒體跨膜電位的變化，正常線粒體內(nèi)，JC-1發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光。凋亡早期的線粒體內(nèi)，由于膜電位的下降或喪失，JC-1產(chǎn)生綠色熒光。通過其熒光的增強(qiáng)或減弱可反應(yīng)線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。

如何檢測晚期凋亡？

細(xì)胞凋亡晚期， 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標(biāo)記的dUTP結(jié)合到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法就是TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。目前YEASEN公司提供的TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，可適用于晚期凋亡檢測。

圖5 TUNEL實(shí)驗(yàn)原理

性能展示（修飾一下）

1.TUNEL探針可檢測石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞不同樣本

不同熒光顏色TUNEL試劑盒，可標(biāo)記細(xì)胞、爬片、石蠟切片等不同樣本，發(fā)射不同熒光信號(hào)。

圖6a TUNEL-FITC檢測細(xì)胞樣本,來源：參考文獻(xiàn)

圖6b TUNEL-Alex488檢測石蠟切片,來源：參考文獻(xiàn)

圖6c TUNEL-Alex640檢測細(xì)胞爬片,來源：參考文獻(xiàn)

2.靶向特定的凋亡晚期中的DNA，具有高選擇性和高靈敏度

納摩爾濃度水平的TUNEL探針，高選擇性地靶向和標(biāo)記晚期凋亡細(xì)胞的片段化DNA的粘性3'-OH末端，發(fā)出強(qiáng)烈熒光信號(hào)，可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞。

3.檢測多樣性

流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦、酶標(biāo)儀等儀器均可以檢測熒光信號(hào)。

圖7 不同儀器檢測TUNEL熒光信號(hào)值

4.背景干擾少、穩(wěn)定性強(qiáng)

不會(huì)出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。

5.翊圣TUNEL探針與進(jìn)口產(chǎn)品比較，價(jià)格低廉

相同規(guī)格條件，比較翊圣與T*進(jìn)口TUNEL-FITC探針價(jià)格差異。

圖8 YEASEN和T*進(jìn)口的TUNEL-FITC產(chǎn)品價(jià)格對(duì)比圖（規(guī)格：50 T）

產(chǎn)品選擇指南

目前翊圣擁有10余種早期凋亡和晚期凋亡檢測試劑盒，各具特色，能夠*用戶各種需求。

表1細(xì)胞凋亡產(chǎn)品選擇指南

訂購信息

表2 2020年翊圣細(xì)胞凋亡產(chǎn)品價(jià)格

公司介紹

上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd）成立于2009年，是國家高新技術(shù)型企業(yè)，長期專注于分子酶原料及建庫試劑盒等產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)。我們的目標(biāo)讓下游企業(yè)節(jié)省更多的成本，為中國精///準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展貢獻(xiàn)自己的力量。

上海翊圣生物公司擁有*分子酶雙向技術(shù)平臺(tái)、大規(guī)模蛋白發(fā)酵純化技術(shù)平臺(tái)、高效抗體篩選技術(shù)平臺(tái)，目前已成功開發(fā)各類診斷分子酶、二代測序建庫酶等40余種，并實(shí)現(xiàn)工業(yè)放大。翊圣生物開發(fā)的PCR類、NGS類、體外診斷（IVD）和相關(guān)酶原料等產(chǎn)品獲得了廣大客戶的認(rèn)可。此外，我們還為工業(yè)客戶提供定制化開發(fā)服務(wù)，以滿足個(gè)性化需求。