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PCR-based Genotyping等實驗，常需純化樣本基因組。當(dāng)待測樣本較多時，純化基因組的過程費時、操作重復(fù)，并且實驗成本高。翌圣生物通過改造Taq DNA聚合酶，優(yōu)化PCR反應(yīng)體系開發(fā)出無需基因組純化的Direct PCR Kit系列產(chǎn)品。
Clever PCR：Direct PCR
翌圣Direct PCR Kit是直接從樣本開始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本（圖1-A）或其裂解產(chǎn)物（圖1-B）作為模板，進行PCR-based Genotyping（見圖1）。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit樣本用量少，操作簡單，實驗成本低，可高通量化樣本檢測。
圖1. Direct PCR技術(shù) A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進行PCR鑒定。B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進行PCR鑒定。
技術(shù)優(yōu)勢
★ 直接：無需進行費時而昂貴的DNA純化
★ 快速：10min完成模板制備，最少50min完成PCR反應(yīng)
★ 簡便：樣品無需剪碎或研磨即可完成裂解;PCR Mix為預(yù)混液形式，減少加樣步驟
★ 節(jié)?。?/span>材料用量少
★ 高通量：可在96孔板中完成裂解反應(yīng)
翌圣生物Direct PCR Kit
產(chǎn)品參數(shù) | Animal Tissue Direct PCR Kit | Mouse Tissue Direct PCR Kit | Plant Tissue Direct PCR kit |
適用生物 | 小鼠、兔子、鳥類、淡水魚、果蠅、線蟲、狗 | 小鼠、大鼠 | 水稻、玉米、煙草、油菜、小麥、大豆等 |
適用組織/材料類型 | 腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、羽毛末端 | 鼠尾、鼠耳、腳趾（帶肌肉）和其他臟器 | 嫩葉、老葉、幼苗、嫩莖 |
樣品使用量 | 5-10mg | 組織：5-10mg，鼠尾：1-5mm | 葉片：1-10mm，種子：1-3mm |
基因組釋放時間 | 5-30min | 15min | 0-10min |
PCR產(chǎn)物最適長度 | ＜1kb | ||
PCR產(chǎn)物是否加A | 裂解反應(yīng)體系加A效率不定 | ||
20µL體系，裂解產(chǎn)物使用量 | 1-4µL | 0.2-2µL | 0.2-1µL |
應(yīng)用 | 轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 | ||
Direct PCR Kit實驗過程
本系列產(chǎn)品運用*的蛋白酶裂解體系，裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的PCR Master Mix進行基因擴增。
圖2.動物、小鼠組織直接PCR實驗過程
圖3.植物組織直接PCR實驗過程
產(chǎn)品優(yōu)勢
改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保證：超強的抑制物耐受性
對于非純化樣本作為模板時，會引入很多對PCR反應(yīng)有抑制的成分。以普通的PCR反應(yīng)體系和Taq DNA聚合酶較難得到理想的結(jié)果，甚至無法進行PCR擴增。本系列試劑盒中PCR Mix為配方優(yōu)化預(yù)混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加與模板DNA結(jié)合能力，對于常見PCR抑制劑具有更高的耐受性，因此具有更廣泛的模板適應(yīng)性。
圖4.直接PCR Kit中的PCR Mix具有更高的雜質(zhì)耐受度。相同模板量，用不同的PCR Mix進行PCR，同時在體系中加入不同濃度的各種PCR反應(yīng)抑制物。比較不同條件下的PCR產(chǎn)物量。
翌圣生物針對不同樣本，開發(fā)出一系列產(chǎn)品
一、多動物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit
★ 最快速：操作時間短
圖5.翌圣動物組織直接PCR試劑盒更加節(jié)省時間。
★ 實驗例：基因敲除小鼠基因型鑒定
圖6.動物組織直接PCR試劑盒檢測基因敲除動物組織直擴結(jié)果。M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解產(chǎn)物為模板。+：以50ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。單條帶（580bp）：敲除動物純合子基因組。單條帶（180bp）：野生型基因組。兩條帶（580bp/180bp）：敲除動物雜合子基因組。
二、嚙齒類專用型：Mouse Tissue Direct PCR Kit
★ 更快速：基因釋放充分
圖7.小鼠組織直接PCR試劑盒不同裂解時間直擴結(jié)果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
★ 更*：基因釋放充分
1、優(yōu)于常規(guī)堿裂解方法
圖8.鼠尾經(jīng)不同裂解方式處理后的直擴結(jié)果。檢測基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常規(guī)堿裂解方式處理裂解產(chǎn)物為模板。3-4：以小鼠組織直接PCR試劑盒裂解產(chǎn)物為模板。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
2、媲美同類產(chǎn)品
圖9.鼠尾經(jīng)不同品牌同類產(chǎn)品裂解處理后的直擴結(jié)果。檢測基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)。
三、植物類專用型：Plant Tissue Direct PCR Kit
多類型植物樣本驗證
圖10.不同類型植物葉片直擴結(jié)果。M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個循環(huán)。
客戶案例
★ 小鼠基因型鑒定
圖11. 北京基石生命科技有限公司用戶使用鼠尾直接PCR試劑盒進行小鼠基因型鑒定結(jié)果
★ 水稻基因直擴
圖12. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)用戶使用植物直接PCR試劑盒擴增水稻相關(guān)基因
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)動物組織直接PCR試劑盒 | 10184ES50/70 | 50T/200 T |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)小鼠組織直接PCR試劑盒 | 10185ES50/70 | 50T/200 T |
Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)植物組織直接PCR試劑盒 | 10187ES50/70 | 50T/200 T |
Animal Tissue Lysis Component動物組織裂解組分 | 19698ES50/70 | 50T/200 T |
Animal Tissue PCR Component動物組織PCR組分 | 10170ES50/70 | 50T/200 T |
HB210805
