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恭喜你~在做分子克隆之前看到了這篇福利好文!

2021-9-3  閱讀(380)

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恭喜你~在做分子克隆之前看到了這篇福利好文!


分子克隆技術發(fā)展至今,從經(jīng)典的酶切酶連法到簡便、快速的同源重組法,同源重組技術廣受科研小伙伴的青睞!翌圣一步法快速克隆試劑盒(Cat#10911、10912)自上市以來,受到了眾多小伙伴的支持!好評如潮!看到各位小伙伴的反饋結果,小翌按捺不住內心的喜悅,要與大家一同分享~




一步法快速克隆試劑盒




翌圣一步法快速克隆試劑盒是一種利用同源重組的原理,進行無縫克隆的技術。該技術無需考慮酶切位點,將PCR產物定向克隆至任何載體的任何位點,可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作過程簡單快速,只需50°C,20 min即可完成反應。勁爆的是,多個片段也可以同時克隆哦!


數(shù)據(jù)展示


01

北京大學

再也不用擔心片段太小,載體過大連不上的問題了

克隆方案:克隆SfGFP1-9基因(588 bp)到載體pBOBI-N-flag(9000 bp)上,檢測其表達。

使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進行克隆,陽性率100%。.jpg

圖1. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進行克隆,陽性率100%。
A:陰性對照轉化平板。B:重組轉化平板。C:線性化載體檢測電泳圖。D:目的片段檢測電泳圖。E:克隆測序對比圖。

02

南京農業(yè)大學

1kb載體連接,克隆數(shù)與陽性率都很高

克隆方案:將目的片段Gmclc1(2352 bp)與表達載體pCAMBIA1300(10217 bp)連接,構建重組載體。
22.jpg圖2. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進行克隆,克隆成功,克隆陽性率為100%。
A:陰性對照轉化平板。B:重組質粒轉化平板。C:1和2分別為原始載體和線性化載體檢測電泳圖。D:目的片段檢測電泳圖。E:菌落PCR鑒定電泳圖。F:重組質粒的酶切鑒定電泳圖。

03

微生物所

輕輕松松5片段連接

克隆方案:克隆外源基因Pcch(576+867+915+647 bp)pBR322質粒(3996 bp)上,用以表達Pcch蛋白。
33.jpg圖3. 使用Hieff Clone® Multi One Step Cloning Kit(Cat#10912)進行克隆,5個片段(總長度7007 bp)一次連接成功。
A:重組質粒轉化平板。B:載體酶切后電泳圖。C:菌落PCR驗證結果;1為原始質粒,2-5為重組質粒,僅檢測863 bp的一個目的片段,6為假陽性。D:陽性克隆測序結果。


04

仁濟醫(yī)院

總長度1kb以上,一次成功

克隆方案:克隆Setd2基因(7500 bp)pCDH載體(8000 bp)
44.jpg圖4. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進行克隆,克隆成功。
A:陰性對照轉化平板。B:重組質粒轉化平板。C:載體和目的片段檢測電泳圖。D:菌落PCR鑒定電泳圖。


部分發(fā)表文獻


1. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017. (IF37.205)

2. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019. (IF31.398)

3. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. (IF31.398)

4. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158. (IF 20.46)

5. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7. (IF14.548)

6. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019. (IF14.548)

7. Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mechano-regulation of peptide-MHC class I conformations determines TCR antigen recognition[J]. Molecular cell, 2019, 73(5): 1015-1027. e7. (IF14.548)

8. Qiao HH, Wang F, et al. An ef?cient and multiple target transgenic RNAi technique with low toxicity in Drosophila[J]. Nat Commun. 2018 Oct 8;9(1):4160. (IF 12.353)



效果大家都看到了,那么我們再來看下為什么同源重組法廣受大家歡迎呢?
與傳統(tǒng)的酶切酶連法相比(圖4),一步法克隆技術足足少了2個步驟(片段酶切+產物純化),這2步最少也要30分鐘,省下的時間去運動一下,比如打個羽毛球~跑個步~科研之余,強身健體,擁有一個更健康的體魄、一張更陽光的臉龐~還有一段開掛的人生~

123.jpg 
圖5. 分子克?。ㄝd體構建)流程對比圖


產 品 推 薦



名稱

貨號

規(guī)格

Hieff Clone®  Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒

10911ES20

20 T

Hieff Clone®  Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒

10912ES10

10 T


好啦!看完本期分享的內容,你是不是也心動啦~心動就行動起來吧!小翌帶你邊做實驗邊擼福利~

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