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N-2無血清添加劑（N-2 supplement,serum free）神經(jīng)干細胞培養(yǎng)手冊
概述
神經(jīng)干細胞(neural stem cell)是指存在于神經(jīng)系統(tǒng)中，具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞的潛能，從而能夠產(chǎn)生大量腦細胞組織，并能進行自我更新，并足以提供大量腦組織細胞的細胞群。
在神經(jīng)干細胞培養(yǎng)中B-27與N-2添加劑的使用十分廣泛，N-2添加劑主要被用于神經(jīng)母細胞瘤以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)（PNS）與中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）來源的有絲分裂后期的神經(jīng)元的生長和表達。
圖1. 神經(jīng)干細胞的發(fā)展
神經(jīng)系統(tǒng)疾病及治療機理
神經(jīng)系統(tǒng)疾病是指發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的以感覺、意識、運動等障礙為主要表現(xiàn)的疾病。包括帕金森病、阿爾茨海默病、卒中性側(cè)索硬化癥（漸凍癥）、多發(fā)性硬化癥、亨廷頓病、脊髓損傷、外傷性腦損傷等。
神經(jīng)干細胞的治療機理是：（i）患病部位組織損傷后釋放各種趨化因子，可以吸引神經(jīng)干細胞聚集到損傷部位，并在局部微環(huán)境的作用下分化為不同種類的細胞，修復(fù)及補充損傷的神經(jīng)細胞。由于缺血、缺氧導致的血管內(nèi)皮細胞、膠質(zhì)細胞的損傷，使局部通透性增加，另外在多種黏附分子的作用下，神經(jīng)干細胞可以透過血腦屏障，高濃度的聚集在損傷部位；（ii）神經(jīng)干細胞可以分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子，促進損傷細胞的修復(fù)；（iii）神經(jīng)干細胞可以增強神經(jīng)突觸之間的聯(lián)系，建立新的神經(jīng)環(huán)路。
N-2添加劑的應(yīng)用
1、膠質(zhì)前體細胞分化為星形膠質(zhì)細胞
星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多功能膠質(zhì)細胞，參與構(gòu)成大腦的物理結(jié)構(gòu)，具有支持神經(jīng)細胞、維持神經(jīng)元周圍離子濃度、免疫調(diào)節(jié)等重要作用。膠質(zhì)前體細胞 (GPC)，也稱為膠質(zhì)限制性祖細胞 (GRP) 或少突膠質(zhì)祖細胞(OPC)，是具有分化為少突膠質(zhì)細胞或星形膠質(zhì)細胞潛力的細胞。GPC群體來源于組織或通過分化從多能細胞產(chǎn)生，這是由外源性應(yīng)?因?誘導的。在這里，我們描述了?種可以調(diào)整以利于分化為星形膠質(zhì)細胞或少突膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)系統(tǒng)。
實驗步驟
1）培養(yǎng)基配制
培養(yǎng)基組分 | 添加量（mL） |
DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，1X | 97 |
N-2無血清添加劑 | 1 |
胎牛血清 | 2 |
2）實驗流程
圖2. 膠質(zhì)前體細胞分化為星形膠質(zhì)細胞實驗流程圖
2、?質(zhì)星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)
星形膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的膠質(zhì)細胞類型，負責支持皮層回路活動所需的一系列功能，包括神經(jīng)遞質(zhì)再攝取、維持離子穩(wěn)態(tài)以及參與突觸形成和消除。同時，神經(jīng)元對星形膠質(zhì)細胞參與層特異的分子發(fā)育調(diào)控具有支持補充作用。神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細胞作為神經(jīng)系統(tǒng)功能單位，它們之間的相互作用在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中非常重要，參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)從胚胎發(fā)生到老化的各個活動，貫穿了神經(jīng)元的整個發(fā)育過程。
實驗步驟
1）培養(yǎng)基的配制
培養(yǎng)基組分 | 添加量（mL） |
DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，1X | 88 |
N-2無血清添加劑 | 1 |
胎牛血清 | 10 |
青霉素-鏈霉素 | 1 |
可選擇添加：EGF（制備為100 μg/mL原液） | 0.02 |
【注】表皮生長因子(EGF)也可以添加，以增強星形膠質(zhì)細胞增殖。
2）實驗流程
圖3. ?質(zhì)星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)實驗流程圖
名詞小貼士：
神經(jīng)（Nerve），是由聚集成束的神經(jīng)纖維所構(gòu)成。 而神經(jīng)纖維本身是由多個神經(jīng)元細胞構(gòu)成，其神經(jīng)元的構(gòu)造為軸突外并被神經(jīng)膠質(zhì)細胞所形成的髓鞘包覆。 如此神經(jīng)能將訊息從動物身體一處傳遞到另外一處，使動物能協(xié)調(diào)指揮動作與進行各種工作。
神經(jīng)元（neuron），又名神經(jīng)原或神經(jīng)細胞，是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能單位之一。人腦中，神經(jīng)細胞約有860億個。
神經(jīng)干細胞（NSCs），是自我更新的多能細胞，可分化為神經(jīng)系統(tǒng)的主要表型。這些細胞類型包括神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞。
神經(jīng)祖細胞（NPC），是干細胞分裂的后代，其通常在體內(nèi)經(jīng)歷有限數(shù)量的復(fù)制循環(huán)。大腦中有許多“專業(yè)的"細胞，比如神經(jīng)細胞，少突膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞。神經(jīng)細胞傳遞和接受信息。少突膠質(zhì)細胞包裹著神經(jīng)細胞，為神經(jīng)細胞更快地傳遞信息提供幫助。星形膠質(zhì)細胞(星形細胞)通過提供營養(yǎng)和從身體的其他部位調(diào)節(jié)進入大腦來支持神經(jīng)系統(tǒng)。
產(chǎn)品優(yōu)勢
1、高效培養(yǎng)，質(zhì)量優(yōu)良；
2、質(zhì)控嚴格，嚴格無菌、無內(nèi)毒素；
3、批次穩(wěn)定，批間差異??；
4、貨期迅速，現(xiàn)貨供應(yīng)。
試劑訂購
培養(yǎng)基及添加劑
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
N-2 supplement,serum free,100X N-2無血清添加劑，100× | 60706ES | 5 mL |
B-27 supplement,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X | 60703ES | 10 mL |
B-27 supplement without Vitamin A,serum free,50X B-27無血清添加劑,50X | 60704ES | 10 mL |
B-27 supplement, minus antioxidants, serum free,50X B-27 無血清添加劑，無抗氧化劑，50X | 60705ES | 10 mL |
HEPES Free Acid?細胞培養(yǎng)級 | 60110ES | 100 g/500 g |
L-alanyl-L-glutamine solution，200mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200mM | 60701ES | 20 mL/100 mL/500 mL |
Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture?細胞培養(yǎng)用青霉素-鏈霉素（雙抗） | 60162ES | 100 mL |
Ceturegel™ Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES | 5 mL/10 mL |
小分子化合物（抑制劑/激活劑）
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Y-27632 | 53006ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
MK-2206 2HCl | 53008ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
GDC-0068(Ipatasertib; RG7440; GDC0068) | 53009ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Dorsomorphin?dihydrochloride? (Dorsomorphin 2HCl) | 53010ES | 1 mg/5 mg/10 mg |
Y-27632 dihydrochloride | 52604ES | 5 mg/10 mg/25 mg |
細胞因子
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Recombinant Human DKK-1 | 92275ES | 20 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human EGF | 92701ES | 100 μg/500 μg |
Recombinant Human bFGF | 91330ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human GDNF | 92102ES | 10 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human Noggin | 92528ES | 5 μg/100 μg/500 μg |
Recombinant Human BDNF | 92129ES | 5 μg/20 μg/100 μg |
