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不會(huì)操作巨噬細(xì)胞清除劑?看這篇就夠了!內(nèi)附文獻(xiàn)解讀~

2024-5-31  閱讀(190)

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巨噬細(xì)胞清除劑產(chǎn)品簡(jiǎn)介

巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的一種重要細(xì)胞,它們?cè)诮M織中扮演著多種角色,包括病原體清除、組織修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等。在某些病理?xiàng)l件下,如慢性炎癥、自身免疫疾病或腫瘤發(fā)展過(guò)程中,巨噬細(xì)胞的異常激活或功能失調(diào)可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不利影響。Clodronate Liposomes 巨噬細(xì)胞清除劑(氯膦酸鹽脂質(zhì)體)是一類(lèi)能夠特異性地消耗或清除巨噬細(xì)胞的藥物或化合物。氯膦酸鹽脂質(zhì)體是目前最為成熟、方便、經(jīng)濟(jì)的一種巨噬細(xì)胞清除工具,可以有效的清除動(dòng)物體內(nèi)包括肝臟,脾臟,肺部,血液等多個(gè)不同組織和部位中的巨噬細(xì)胞,也是目前使用廣泛的一種巨噬細(xì)胞清除的方法。

 

 

常見(jiàn)應(yīng)用方向文獻(xiàn)實(shí)例


01

脂肪組織

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 21931688

文獻(xiàn)旨在探討肥胖相關(guān)的脂肪組織炎癥,特別是脂肪組織中浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞,是否是胰島素抵抗和2型糖尿病發(fā)展的原因。

 

小鼠品系:C57BL/6J 雄性小鼠。

 

實(shí)驗(yàn)方法:通過(guò)用普通飼料和高脂肪飼料分別喂養(yǎng)小鼠,將小鼠分為正常飲食和高脂飲食(DIO)兩組。對(duì)高脂飲食小鼠分別注射clodronate liposomes和PBS liposomes(對(duì)照組),在第一次注射后的6至7天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 

注射方式:靜脈注射。

 

注射劑量:注射巨噬細(xì)胞清除劑兩次,劑量約110 mg/kg,中間間隔三天。

 

檢測(cè)方法:代謝參數(shù)檢測(cè)(小鼠的血糖、血漿胰島素水平、肝臟重量和甘油三酯含量)、高胰島素-正常血糖鉗夾實(shí)驗(yàn)、組織學(xué)檢查、RT-qPCR等。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:該研究表明通過(guò)減少內(nèi)臟脂肪組織中的巨噬細(xì)胞可以改善DIO小鼠的代謝狀況和胰島素敏感性,這部分可以歸因于adiponectin水平的增加。

 

 

圖1. 氯膦酸脂質(zhì)體對(duì)DIO小鼠脂肪中巨噬細(xì)胞消耗的影響

02

肝臟

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 31996460

文獻(xiàn)作者通過(guò)小鼠腹腔注射clodronate liposomes清除巨噬細(xì)胞,并在缺血-再灌注損傷(IRI)前通過(guò)尾靜脈注射骨髓源性巨噬細(xì)胞,以此來(lái)研究巨噬細(xì)胞在肝臟IR損傷中的作用及其潛在的分子機(jī)制。

 

小鼠品系:6-8周齡的雄性C57BL/6小鼠。

 

注射方式:腹腔注射。

 

注射劑量:400 μL/只。

 

給藥方式:注射clodronate liposomes后,為避免小鼠感染,喂食小鼠含有氨芐西林(Ampicillin,1 mg/mL)的飲用水直到小鼠死亡。

 

檢測(cè)方法:注射clodronate liposomes 48小時(shí)后使用免疫組織化學(xué)(圖2-A)和流式細(xì)胞儀(圖2-G)進(jìn)行檢測(cè)。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

圖2.Roquin-1對(duì)肝臟IR損傷的影響

03

腫瘤

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 31933479
文獻(xiàn)作者通過(guò)腹腔注射clodronate liposomes的方式,根據(jù)以往的研究和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定的特定劑量和頻率清除小鼠體內(nèi)的巨噬細(xì)胞,以此來(lái)研究巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響。


小鼠品系: NSGs 小鼠。


注射方式:腹腔注射。


注射劑量:每周三次,每次6.5 mL/g。


檢測(cè)方法:生物發(fā)光成像(BLI)、免疫熒光、RT-qPCR等技術(shù)。


實(shí)驗(yàn)結(jié)果:使用clodronate liposomes清除巨噬細(xì)胞,觀察到在原位移植的MYC/Twist1-HCC小鼠中,肝臟和肺部的轉(zhuǎn)移灶數(shù)量顯著減少,表明巨噬細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到了重要作用。

 

圖3.Twist1通過(guò)巨噬細(xì)胞依賴(lài)機(jī)制誘導(dǎo)MYC-HCC轉(zhuǎn)移

04

胚胎小膠質(zhì)細(xì)胞

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 29559892

文獻(xiàn)探討在大鼠胚胎子宮內(nèi)給予針對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia,一種腦區(qū)巨噬細(xì)胞)的藥物,對(duì)于改善由巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)感染的大鼠胎兒大腦的神經(jīng)發(fā)育結(jié)果的影響。

 

小鼠品系:Wistar rats(RCMV-1 145-147-gfp)。

 

注射方式:雌性大鼠子宮內(nèi)胚胎腦室注射。

 

注射劑量:0.5 µL/injection。

 

給藥方式:在胚胎第 15 天時(shí),實(shí)驗(yàn)組同時(shí)注射巨噬細(xì)胞清除劑(0.5 µL/injection)的和rat CMV(1.75×103 pfu),對(duì)照組注射注射含磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的脂質(zhì)體(0.5 µL/injection),并在大鼠整個(gè)妊娠期間服用多西環(huán)素(200 mg/kg飼料)。

 

檢測(cè)方法:免疫組化、組織透明化、流式細(xì)胞術(shù)、共聚焦顯微鏡、RT-qPCR等技術(shù)。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:使用氯磷酸鹽脂質(zhì)體耗竭小膠質(zhì)細(xì)胞和母體攝取多西環(huán)素治療均與顯著提高生存率、改善增重、改善感覺(jué)運(yùn)動(dòng)發(fā)育和降低癲癇發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。

 

圖4.氯膦酸脂質(zhì)體可消耗小膠質(zhì)細(xì)胞并減少 CMV 在發(fā)育中大腦中的傳播

05

胃腸道

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 36263186

文獻(xiàn)研究旨在探討TMP195(一種選擇性IIa類(lèi)組蛋白去乙?;窰DAC抑制劑)在結(jié)直腸癌(CRC)治療中的作用及其機(jī)制??紤]到HDAC與癌癥的密切關(guān)系,以及IIa類(lèi)HDAC抑制劑與免疫功能的關(guān)聯(lián),研究者們特別關(guān)注了TMP195對(duì)M1型巨噬細(xì)胞極化的影響,以及它與PD-1阻斷療法聯(lián)合使用的潛在治療效果。

 

小鼠品系:C57BL/6。

 

注射方式:腹腔注射。

 

注射劑量:200 µL/次。

 

給藥方式:在MC38細(xì)胞接種前兩天開(kāi)始注射,每三天一次,每次200 µL,直至小鼠死亡。

 

檢測(cè)方法:結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌模型、流式細(xì)胞儀、組織病理學(xué)和免疫染色、RT-qPCR、ELISA等。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:使用氯磷酸鹽脂質(zhì)體部分耗竭巨噬細(xì)胞時(shí),TMP195的抗腫瘤效果消失,表明TMP195的療效可能依賴(lài)于巨噬細(xì)胞。

 

圖5.巨噬細(xì)胞消耗可削弱 TMP195 對(duì)結(jié)直腸癌的治療效果

圖6.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) M1 巨噬細(xì)胞和 T 淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)情況

06

腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 30980832

文獻(xiàn)探討了在大鼠模型中,創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)后立即耗竭小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)細(xì)胞和行為病理學(xué)的影響。

 

小鼠品系: Sprague-Dawley rat。

 

注射方式:顱內(nèi)注射。

 

注射劑量:10 µL。

 

給藥方式:

  1. 術(shù)前麻醉:用異氟醚(5%誘導(dǎo),1-2%維持)麻醉動(dòng)物,拆除縫線,重新打開(kāi)切口,清洗頭骨,將動(dòng)物放入立體定向頭架。

  2. 鉆孔:在顱骨上鉆一個(gè)毛刺孔,用 10 μL Hamilton® 80000 1701N 注射器將 10 μL脂質(zhì)體懸浮液(脂質(zhì)體大小 = 2 μm)緩慢注入大腦皮層和丘腦。

  3. 術(shù)后操作:手術(shù)后,動(dòng)物在單獨(dú)的籠子里恢復(fù)至少 60 分鐘,然后再放回母鼠身邊。手術(shù)過(guò)程和術(shù)后恢復(fù)均在 37°C 的加熱墊上進(jìn)行,以保持體溫。

    注:文獻(xiàn)中提到的兩個(gè)注射位置的坐標(biāo)點(diǎn):大腦皮層(cortex)的坐標(biāo)(-1.5mm AP, 1.7mm ML和 1.7mm DV);丘腦(thalamus)的坐標(biāo)(-3.5mm AP,1.7mm ML和 3.5mm DV)。坐標(biāo)是根據(jù)Paxinos和Watson的第三版大鼠腦立體定位圖譜來(lái)確定的。

  4. 檢測(cè)方法:病理學(xué)評(píng)估、電生理學(xué)檢測(cè)等。

     

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

圖7.氯膦酸鹽誘導(dǎo)的耗竭后皮層中的小膠質(zhì)細(xì)胞活化

07

肺泡巨噬細(xì)胞

文獻(xiàn)來(lái)源:PMID 22110592

研究探討了肺部缺血對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞的影響,特別是在小鼠模型中,左肺動(dòng)脈全阻塞后,左肺與外周循環(huán)隔離,直至5-7天后新的系統(tǒng)血管進(jìn)入肺實(shí)質(zhì)。使用氯磷酸鹽脂質(zhì)體處理小鼠,耗竭單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞,并評(píng)估對(duì)血管生成的影響。

 

小鼠品系:C57Bl/6。

 

注射方式:腹腔注射+氣管給藥。

 

注射劑量:100 µL。

 

動(dòng)物模型:

  1. 動(dòng)物準(zhǔn)備:選擇5-6周齡的雄性C57Bl/6小鼠,并按照約翰霍普金斯大學(xué)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)的體內(nèi)協(xié)議進(jìn)行操作。

  2. 麻醉:使用2%異氟醚對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉。

  3. 氣管插管:小鼠被麻醉后,進(jìn)行氣管插管并連接到呼吸機(jī)(每分鐘120次呼吸,每次0.2毫升)。

  4. 左肺動(dòng)脈結(jié)扎:在左側(cè)胸腔進(jìn)行側(cè)切口。通過(guò)手術(shù)切口,找到并結(jié)扎左肺動(dòng)脈。這個(gè)步驟會(huì)切斷左肺的血液供應(yīng),模擬缺血狀態(tài)。結(jié)扎完成后,關(guān)閉胸腔切口,拔除氣管插管,并允許小鼠恢復(fù)。

  5. 樣本收集:在LPAL后的不同時(shí)間點(diǎn),通過(guò)頸椎脫位的方式處死小鼠,并收集肺組織和進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(BAL)。對(duì)收集的肺組織進(jìn)行進(jìn)一步的分析,包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)分析、免疫組化和免疫熒光染色等。

     

給藥方式:在左肺動(dòng)脈結(jié)扎(LPAL)24小時(shí)前、LPAL后1、5、9天分別注射氯磷酸鹽脂質(zhì)體或?qū)φ誔BS脂質(zhì)體(長(zhǎng)療程),或者僅在LPAL前24小時(shí)和LPAL后24小時(shí)給予治療(短療程)。

 

檢測(cè)方法:細(xì)胞流式等。

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析,確認(rèn)氯磷酸鹽脂質(zhì)體處理后巨噬細(xì)胞數(shù)量的減少情況。在短療程和長(zhǎng)療程的氯磷酸鹽脂質(zhì)體處理后,觀察到肺組織中總巨噬細(xì)胞數(shù)量的顯著減少。

 

圖8.LPAL 后離體左肺組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化

 

產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

Clodronate Liposomes(From Vrije Universiteit Amsterdam)體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除劑

40337ES08

5 mL

40337ES10

10 mL

Control Liposomes(PBS)體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除劑空白脂質(zhì)體對(duì)照

40338ES08

5 mL

40338ES10

10 mL



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