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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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引 言
熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑，作為藥物研發(fā)中的核心工具，以其實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)基因表達(dá)和信號(hào)傳遞的能力，在高通量篩選、藥效評(píng)估和靶點(diǎn)驗(yàn)證等關(guān)鍵環(huán)節(jié)中扮演著至關(guān)重要的角色。這一技術(shù)的應(yīng)用顯著提高了藥物篩選和評(píng)估的效率，加速了新藥的發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)過(guò)程。
熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)原理
熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)通過(guò)熒光素酶催化luciferin氧化成oxyluciferin并產(chǎn)生生物熒光，實(shí)現(xiàn)對(duì)螢火蟲(chóng)熒光素酶活性的定量分析。該技術(shù)在miRNA靶基因驗(yàn)證、啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。通過(guò)將目標(biāo)基因的調(diào)控元件插入熒光素酶基因的上下游，構(gòu)建熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，可以轉(zhuǎn)染細(xì)胞并進(jìn)行相應(yīng)的刺激或處理。隨后，通過(guò)裂解細(xì)胞并測(cè)定熒光素酶活性，可以評(píng)估不同刺激條件下調(diào)控元件的活性變化，從而深入理解基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。
單熒光素酶和雙熒光素酶檢測(cè)應(yīng)用的差異
關(guān)于報(bào)告基因檢測(cè)，主要分為單熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)及雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)，具體應(yīng)用中，怎么知道自己的實(shí)驗(yàn)是用單熒光素酶還是雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)呢?下面我們看一下兩者的差異。
單熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)
報(bào)告基因數(shù)量：螢火蟲(chóng)熒光素酶單一報(bào)告基因；
轉(zhuǎn)染類型：?jiǎn)蝹€(gè)報(bào)告基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后通過(guò)藥物篩選，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的報(bào)告基因細(xì)胞株；
檢測(cè)流程：僅需檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶信號(hào)，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期短，適合高通量藥物篩選使用；
應(yīng)用場(chǎng)景分析：一般是通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)單克隆細(xì)胞株，因?yàn)榧?xì)胞株的表達(dá)量比較穩(wěn)定，均一，不存在因轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞活率等變異情況對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。并且操作簡(jiǎn)單，由于只檢測(cè)螢火蟲(chóng)信號(hào)，所以數(shù)據(jù)分析更加便捷，再加上檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)，特別適合高通量藥物篩選，滿足大規(guī)模樣本檢測(cè)的需求。
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)
報(bào)告基因數(shù)量：螢火蟲(chóng)熒光素酶+海腎熒光素酶雙重報(bào)告基因；
轉(zhuǎn)染類型：兩個(gè)報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，主要是通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染；
檢測(cè)流程：需要先檢測(cè)螢火蟲(chóng)再檢測(cè)海腎信號(hào)，兩者的比值（Firefly/Renilla）用于最終的數(shù)據(jù)計(jì)算；
應(yīng)用場(chǎng)景分析：一般是通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，通過(guò)共轉(zhuǎn)染含有海腎熒光素酶基因的質(zhì)粒作為內(nèi)參，為實(shí)驗(yàn)提供一個(gè)基準(zhǔn)線，從而減少細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素的干擾，通過(guò)比值計(jì)算，可以校正細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性的變異，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。是研究基因表達(dá)調(diào)控、信號(hào)傳導(dǎo)途徑和藥物篩選等領(lǐng)域的重要工具。
系列產(chǎn)品
翌圣熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系列產(chǎn)品提供簡(jiǎn)便、高效的定量檢測(cè)方案。單一組分設(shè)計(jì)簡(jiǎn)化了使用流程，高靈敏度與5小時(shí)超長(zhǎng)信號(hào)半衰期的結(jié)合，滿足大規(guī)模藥物篩選檢測(cè)需求。我們提供Bio-One Step、Steady-One Step和Bright-One Step三種產(chǎn)品，以適應(yīng)不同靈敏度和穩(wěn)定性需求。
產(chǎn)品名稱 | Bio-One Step | Steady-One Step | Bright-One Step |
產(chǎn)品貨號(hào) | 11411ES | 11404ES | 11412ES |
應(yīng)用場(chǎng)景及特性 | 本試劑盒在信號(hào)強(qiáng)度與穩(wěn)定性之間做到了相對(duì)平衡。即保持了相對(duì)較高的信號(hào)強(qiáng)度，又在一定的時(shí)間內(nèi)保持信號(hào)強(qiáng)度的相對(duì)穩(wěn)定。 | 半衰期可持續(xù)5 h以上。尤其在前2 h發(fā)光值變化較小。適合于超高通量或384孔板檢測(cè)。 | 高靈敏度，高信號(hào)強(qiáng)度。適合于對(duì)靈敏度有較高要求的實(shí)驗(yàn)。 |
信號(hào)半衰期 | 60 mins | 5 h以上 | 30 mins |
操作特點(diǎn) | 一步法 | 一步法 | 一步法 |
上機(jī)等待時(shí)間 | 10 mins內(nèi)信號(hào)基本沒(méi)有變化 | 40 mins內(nèi)信號(hào)基本沒(méi)有變化 | 5 mins內(nèi)信號(hào)基本沒(méi)有變化 |
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
信號(hào)半衰期久：信號(hào)半衰期最高可達(dá)5h，滿足高通量實(shí)驗(yàn)需求，避免樣本量多導(dǎo)致的首尾孔因時(shí)間差引起的信號(hào)差異，保證結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
熒光信號(hào)強(qiáng)：信號(hào)值可達(dá)8次方，檢測(cè)窗口大，為早期藥物篩選和藥效評(píng)估提供了強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持。
操作方便：一步法操作，避免繁瑣的實(shí)驗(yàn)流程，直接加入檢測(cè)試劑，等待5mins 即可上機(jī)檢測(cè)。
多種選擇：根據(jù)應(yīng)用場(chǎng)景不同，提供了3款不同產(chǎn)品，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)信號(hào)值、信號(hào)穩(wěn)定性的需求進(jìn)行選擇。
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
翌圣不同報(bào)告基因檢測(cè)試劑性能比較
在穩(wěn)定過(guò)表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶的細(xì)胞株上進(jìn)行三種類型檢測(cè)試劑的驗(yàn)證，結(jié)果顯示，Bright-One Step產(chǎn)品擁有更高的信號(hào)值；Steady-One Step產(chǎn)品信號(hào)半衰期更久，信號(hào)更穩(wěn)定；Bio-One Step產(chǎn)品擁有高信號(hào)值的同時(shí)還保持較長(zhǎng)的信號(hào)半衰期。
圖1. 翌圣不同報(bào)告基因檢測(cè)試劑性能比較
翌圣Bio-One Step熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑和競(jìng)品比較
在穩(wěn)定過(guò)表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶的細(xì)胞株上使用翌圣Bio-One Step、競(jìng)品P和競(jìng)品V同時(shí)檢測(cè)，結(jié)果顯示，翌圣Bio-One Step產(chǎn)品信號(hào)值及信號(hào)半衰期和競(jìng)品P基本保持一致，信號(hào)半衰期優(yōu)于競(jìng)品V。
圖2. 翌圣Bio-One Step熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑和競(jìng)品比較
翌圣Bio-One Step熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑反復(fù)凍融測(cè)試
翌圣Bio-One Step熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示即使經(jīng)過(guò)5次凍融循環(huán)，產(chǎn)品性能依然保持穩(wěn)定，無(wú)顯著變化。
圖3. 翌圣Bio-One Step熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑反復(fù)凍融測(cè)試
操作流程
直接在細(xì)胞懸液中加入試劑后用槍頭吹打5次，等待5 mins，使細(xì)胞充分裂解。
上樣
每孔吸取100 μL混合液（檢測(cè)試劑+細(xì)胞培養(yǎng)基）到檢測(cè)板。
熒光檢測(cè)
設(shè)置酶標(biāo)儀參數(shù)。將檢測(cè)板放入酶標(biāo)儀，震動(dòng)幾秒，檢測(cè)即可。
產(chǎn)品清單
產(chǎn)品類別 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品規(guī)格 |
單熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑 | Bio-One Step Luciferase Assay Kit Bio-One Step 螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T |
Steady-One Step Luciferase Assay Kit Steady-One Step 螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11404ES60/80/81 | 100T/1000T /10×100T | |
Bright-One Step Luciferase Assay Kit Bright-One Step螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑 | Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11402ES60/80 | 100T/1000T |
Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 輝光型雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒 | 11405ES60/80 | 100T/1000T |
