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為提高含高GC含量或連續(xù)多個A/T的復雜基因的PCR擴增效率及擴增特異性，科研人員通常會嘗試在PCR反應體系中添加增效劑。翊圣生物現(xiàn)為廣大科研人員提供質(zhì)量高、適用性廣的兩種PCR增效劑：甜菜堿與海藻糖。
其中，海藻糖（Trehalose）是一種雙糖，能夠在高溫、高寒、干燥失水等惡劣的條件下在細胞表面形成特殊的保護膜，有效的保護生物分子結(jié)構(gòu)不被破壞，從而維持生命體的生命過程和生物特征。翊圣生物提供的海藻糖，為海藻糖水合物，分子式為C12H22O11•2H2O，純度≥99%，金屬離子含量低，可用于分子生物學實驗。
產(chǎn)品介紹
翊圣生物是在工具酶及其反應輔助試劑方面經(jīng)驗，確保*高品質(zhì)海藻糖，并大量現(xiàn)貨，可保證批次間產(chǎn)品的穩(wěn)定性。該產(chǎn)品可作為酶保護劑，用于DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等工具酶的穩(wěn)定劑，因此作為PCR、RT-PCR、qPCR等實驗反應優(yōu)化的添加劑成分，大大改善擴增效率和擴增特異性、改善逆轉(zhuǎn)錄效率等。
海藻糖特點
1. 海藻糖具有熱穩(wěn)定性和熱激活特性。海藻糖在蛋白熱變性過程中可維持蛋白的骨架，保持其天然結(jié)構(gòu)。在分子生物學多種酶促反應中得到驗證，如逆轉(zhuǎn)錄酶參與的cDNA合成，Dnase I參與的DNA降解，限制性內(nèi)切酶的酶切反應等[1]。
2. 海藻糖可作為PCR增強劑。通過降低DNA雙鏈融解溫度，維持Taq DNA聚合酶穩(wěn)定性，提高PCR反應效率[2]。
3. 海藻糖可中和抑制劑對DNA聚合酶的抑制作用，維持PCR擴增效率。海藻糖作為SYBR Green I法實時熒光定量PCR添加劑，有效降低SYBR Green I對PCR的抑制[3]。
4. 海藻糖可作為樣本基因組或極低濃度基因組的保存劑[4]。
圖1. 海藻糖可保護Taq DNA聚合酶酶活性，提升PCR擴增性能
數(shù)據(jù)來源DOI: 10.1373/clinchem.2004.031336 Published June 2004
主要應用
1. 作為酶穩(wěn)定劑，維持酶的活性及熱活化后的酶活性。
2. 可應用于DNA的測序反應實驗中，提升含有重復序列(連續(xù)多個A或T)的測序性。
3. 復雜模板的PCR擴增，如高GC含量的樣本。
4. 適用于較長cDNA的逆轉(zhuǎn)錄反應，尤其是全長cDNA的合成，提升文庫建立的覆蓋度。
5. 微量DNA樣品的保存劑。
6. qRT-PCR反應體系添加劑，提升反應性能。
溶液配制
溶于水。50mg/ml。
海藻糖參數(shù)
中文別名（Chinese Synonym） | α,α-海藻糖，α-D-吡喃葡萄糖基-α-D-吡喃葡萄糖苷 |
英文別名（English Synonym） | alpha-D-Glucopyranosyl-alpha-D-glucopyranoside; Mycose |
CAS 號（CAS NO.） | 6138-23-4 |
分子式（Molecular Formula） |
|
分子量（Molecular Weight） |
|
外觀（Appearance） | 白色或灰白色粉末 |
溶解性（Solubility） | 溶于水 |
純度（Purity） | ≥99% |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
|
參考文獻
[1]. Butler SL,Falke JJ. Effects of protein stabilizing agents on thermal backbone motions: a disulfide trapping study. Biochemistry.1996 Aug 20;35(33):10595-600.
[2]. Spiess AN,Mueller N,Ivell R. Trehalose is a potent PCR enhancer: lowering of DNA melting temperature and thermal stabilization of taq polymerase by the disaccharide trehalose. Clin Chem.2004 Jul;50(7):1256-9.
[3]. Horáková H.1,2-propanediol-trehalose mixture as a potent quantitative real-time PCR enhancer.BMC Biotechnol.2011 Apr 18;11:41. doi: 10.1186/1472-6750-11-41.
[4]. Smith S,Morin PA.Optimal storage conditions for highly dilute DNA samples: a role for trehalose as a preserving agent.J Forensic Sci.2005 Sep;50(5):1101-8.
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