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40302ES50Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 40302ES50 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):4664更新時間:2022-11-07 15:29:58

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產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20T
貨號 40302ES50 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 用FITC標(biāo)記了的Annexin V作為探針,來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC標(biāo)記了的Annexin V作為探針,來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生,可用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息


產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格(元)

*(元)

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

40302ES20

20 T

480.00

366.00

40302ES50

50 T

960.00

686.00

40302ES60

100 T

1680.00

986.00


產(chǎn)品描述


Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用FITC標(biāo)記的Annexin V作為探針,來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生。

其檢測原理為:在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲、氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細(xì)胞中,PS從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合,可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲、氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。

另外,本試劑盒中還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。PI是一種核酸染料,它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但可以透過凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此,將Annexin V與PI聯(lián)合使用時,PI則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時被FITC和PI結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性(Annexin V+/PI+)。

本試劑盒可用于流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。


產(chǎn)品組分


編號

組分

產(chǎn)品編號/規(guī)格

40302ES20(20 T)

40302ES5050 T

40302ES60100 T

40302-A

Annexin V-FITC

100 μL

250 μL

500 μL

40302-B

PI Staining Solution

200 μL

500 μL

1 mL

40302-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL


運輸與保存方法


冰袋(wet ice)運輸。-20 ℃避光長期保存,避免反復(fù)凍融,一年有效。

【注】:如果需要在短時間內(nèi)多次重復(fù)使用,可以在4 ℃避光保存,半年有效。


注意事項


1)由于細(xì)胞凋亡是一個快速的過程,建議樣品在染色后1小時之內(nèi)進(jìn)行分析。

2)對于貼壁細(xì)胞,消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時要小心操作,盡量避免人為的損傷。胰\酶消化時間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷;PI攝入過多,消化時間過長,細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲、氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合。消化時將胰\酶鋪滿孔板底后,輕搖使胰\酶與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分胰\酶,利用剩余少量胰\酶再消化一段時間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。

3)實驗中如需要固定細(xì)胞,比如在檢測凋亡的同時檢測細(xì)胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因為在固定過程中EGFP會變性導(dǎo)致喪失激發(fā)熒光的能力。固定前需要先將細(xì)胞與Annexin V-FITC進(jìn)行孵育,并用Binding buffer洗掉未結(jié)合的Annexin V-FITC。因為固定過程中細(xì)胞通透性增加會產(chǎn)生細(xì)胞碎片,可以和Annexin V結(jié)合,對結(jié)果產(chǎn)生干擾。

4)如果樣品來源于血液,請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實驗結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。

5)試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。

6)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避。


操作方法


1.1 樣品染色

1)懸浮細(xì)胞300 g,4 ℃離心5 min收集細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的胰\酶消化后,300 g,4 ℃離心5 min收集細(xì)胞。胰\酶消化時間不宜過長,以防引起假陽性。

2)用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次,每次均需300 g,4 ℃離心5 min。收集1~5×105細(xì)胞。

3)吸棄PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細(xì)胞。

4)加入5 μL Annexin V-FITC10 μLPI Staining Solution,輕輕混勻。

5)避光、室溫反應(yīng)10~15 min。

6)加入400 μL 1×Binding Buffer,混勻后放置于冰上,樣品在1 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。

為了避免洗滌細(xì)胞時損失細(xì)胞,在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。

1.2 樣品分析

A.流式細(xì)胞儀分析:

FITC激發(fā)波長為488 nm大發(fā)射波長525 nm,F(xiàn)ITC的綠色熒光在FL1通道檢測PI-DNA復(fù)合物的大激發(fā)波長為535 nm,大發(fā)射波長為615 nm,PI的紅色熒光在FL2或FL3通道檢測。用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。典型的實驗中,細(xì)胞可以分成三個亞群,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色熒光雙重染色。

B.熒光顯微鏡分析:

1滴一滴用Annexin V-FITC/PI雙染的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞,可直接用蓋玻片培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。Annexin V-FITC熒光信號呈綠色,PI熒光信號呈紅色。


數(shù)據(jù)展示


數(shù)據(jù)來源:上海交通大學(xué)納米生物工程研究所

文章信息Cui, D., et al., Regression of Gastric Cancer by Systemic Injection of RNA Nanoparticles Carrying both Ligand and siRNA. Sci Rep, 2015. 5: p. 10726.

細(xì)胞類型MGC803 cells;

所用試劑:Yeasen,Cat:40302,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 。

“Fig5.Determination of cell death by flow cytometry of Annexin V-FITC/PI staining in MGC803 cells transfected with 25 nM FA-pRNA-3WJ-BRCAA1siRNA or FA-pRNA-3WJ-Scram-siRNA for 48 h."


數(shù)據(jù)來源:中山大學(xué);

文章信息:Zhou, T., et al., Mild hypothermia protects against oxygen glucose deprivation/reoxygenation-induced apoptosis via the Wnt/beta-catenin signaling pathway in hippocampal neurons. Biochem Biophys Res Commun, 2017. 486(4): p. 1005-1013.

細(xì)胞類型Hippocampal neurons;

所用試劑:Yeasen,Cat:40302 ,Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

“Fig. 3. Wnt/b-catenin mediates the expression levels of apoptosis-related proteins and the protective effects of mild hypothermia against OGD/R-induced apoptosis。scatter diagram of PI/Annexin V gating from different groups. a. Control; b.OGD/R; c.OGD/R t MH(24 h); d.OGD/R t MH(24 h)tDkk1; e. OGD/R t Dkk1."


相關(guān)產(chǎn)品


產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格(元)

*(元)

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

40301ES50

50 T

298.00

-

40301ES60

100 T

528.00

-

Annexin V-EGFP/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

40303ES20

20 T

480.00

386.00

40303ES50

50 T

960.00

786.00

40303ES60

100 T

1680.00

1346.00

Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit

40304ES20

20 T

518.00

386.00

40304ES50

50 T

1120.00

786.00

40304ES60

100 T

1960.00

1346.00

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

40305ES20

20 T

518.00

386.00

40305ES50

50 T

1120.00

786.00

40305ES60

100 T

1960.00

1346.00

Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

40310ES20

20 T

480.00

386.00

40310ES50

50 T

960.00

786.00

40310ES60

100 T

1680.00

1346.00

HB200309





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