產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit）采用了經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法對(duì)細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一種雙鏈DNA熒光染料，其嵌入雙鏈DNA后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被PI染色后，可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定，根據(jù)DNA含量的分布情況，進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。

PI染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA段化 (DNA fragmentation) 導(dǎo)致部分基因組DNA斷在染色過(guò)程中丟失，因此凋亡細(xì)胞PI染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。

細(xì)胞凋亡也可以用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞光散射的變化來(lái)檢測(cè)。 細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。凋亡前期，染色質(zhì)皺縮，細(xì)胞密度增加，前向角光散射色顯著降低。凋亡后期，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體，前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。

本試劑盒通常應(yīng)用于貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測(cè)。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方法

運(yùn)輸：冰袋（wet ice）運(yùn)輸。

保存方法：-20℃避光保存，有效期為2年。

【注】如果需要在短時(shí)間內(nèi)多次重復(fù)使用，可以于4℃避光保存，2個(gè)月內(nèi)有效。

注意事項(xiàng)

1）本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

2）細(xì)胞處理需輕柔，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
3）為防止不同批次細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)時(shí)所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差，可以在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行細(xì)胞的同步化處理。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)

生長(zhǎng)期，貼壁細(xì)胞一般在50～80%匯合度時(shí)收集為宜。
4）400目篩網(wǎng)過(guò)濾是用來(lái)將粘在一起的細(xì)胞團(tuán)濾掉，留下單細(xì)胞，否則會(huì)出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒(méi)有條件過(guò)濾，請(qǐng)?jiān)谌旧皩⒓?xì)胞輕彈以分散，再進(jìn)行染色。

5）熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

6）操作碘化丙啶時(shí)，應(yīng)注意防護(hù)，保護(hù)眼睛、避免吸入。

7）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

8）本產(chǎn)品僅作科研用途!

使用方法

1）細(xì)胞樣品制備：細(xì)胞數(shù)量控制在1×10⁵~1 × 10⁶個(gè)。
a）貼壁細(xì)胞：小心吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用胰|酶消化細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，棄上清，用1 mL預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞一次，離心收集細(xì)胞。
b）懸浮細(xì)胞：1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。加入1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心收集細(xì)胞。
c）組織細(xì)胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰|酶消化0.5-1 h，經(jīng)過(guò)200-400目篩網(wǎng)過(guò)濾得到單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞。加入約1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。
2）細(xì)胞固定：細(xì)胞沉淀用1 mL預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2 h以上或者過(guò)夜。接下來(lái)1000 g，離心5 min沉淀細(xì)胞后，用1 mL預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000 g離心5 min沉淀細(xì)胞。
3）染色：在0.5 mL染色緩沖液(40301-C)中加入10 μL 碘化丙啶儲(chǔ)液（40301-B）和10 μLRNase A（40301-A）溶液，混勻待用。每個(gè)細(xì)胞樣品加入0.5 mL配置好的碘化丙啶染色  液，輕輕混勻重懸細(xì)胞。37℃避光孵育30min，就可以進(jìn)行流式檢測(cè)，流式檢測(cè)最好在5h內(nèi)完成。
【注】：配置好的PI染色液在短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存，宜當(dāng)日使用。

4）流式檢測(cè)和分析：細(xì)胞用400目篩網(wǎng)過(guò)濾，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析

HB210526