HB170227

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

細(xì)胞衰老（Cell senescence）是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機制，一般含義是復(fù)制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細(xì)胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂后，停止分裂，此時細(xì)胞雖然是存活的，但是細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細(xì)胞研究常用的生物學(xué)特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性，但是衰老細(xì)胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性，且隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。

本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學(xué)特征而設(shè)計的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍(lán)色產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察顏色變化以分析細(xì)胞的衰老狀況。

本試劑盒可以培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。產(chǎn)品性能穩(wěn)定，參數(shù)經(jīng)優(yōu)化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細(xì)胞進(jìn)行染色，不會染色衰老前的細(xì)胞（presenescent cells）、靜止期細(xì)胞（quiescent cells）、永生細(xì)胞（immortal cells）或腫瘤細(xì)胞。

產(chǎn)品組分

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護。

3）細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值，不能用于細(xì)胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。因為CO2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

4）40754-B剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實驗。配置染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會*溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于*溶解狀態(tài)。

5）X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細(xì)胞樣品可以在4ºC冰箱保存，但也需避免光照。

使用方法

1. 實驗前的準(zhǔn)備工作：

1. 染色工作液配制

實驗開始前，將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出，*溶解。其中X-Gal溶液置入冰槽里等待溶化。根據(jù)表1進(jìn)行染色工作液的配置，實驗體系類型，檢測樣本數(shù)，統(tǒng)一配制單次實驗需要的染色工作液總量。

• 1 染色工作液配方表

【注】配制染色工作液時需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內(nèi)進(jìn)行，如細(xì)胞培養(yǎng)常用的6孔板。

1. 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色（貼壁細(xì)胞）：

1）吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。

2）吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。

3）吸除PBS/HBSS，每孔加入1ml預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個生長表面。

4）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發(fā)。

• 37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

5）普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)SA β-gal的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液，加入2ml PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時間。

1. 懸浮細(xì)胞染色：

1）離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細(xì)胞結(jié)成團塊。

2）離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。

3）離心，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1ml預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。

4）37℃孵育過一晚上。

【注】37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

5）取部分染色好的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心，去除染色工作液，加入1ml PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天。也可取細(xì)胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時間。

1. 組織切片染色：

1）對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟或水化處理。對于冰凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行；

2）加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15min。

3）用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5min；

4）吸除PBS，加入適當(dāng)量的預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。

5）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，把整個切片浸泡在染色工作液中。

• 37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。

6）普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)。如不能及時觀察計數(shù)，加上封片劑封片后4℃可保存較長時間。