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  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南十一

    蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)是鑒定和定量細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)的科學(xué)，目的是了解生物學(xué)變化和疾病狀態(tài)，開發(fā)疾病的生物標(biāo)記和治療藥物的靶點(diǎn)。如果將一個基礎(chǔ)蛋白的各個修飾蛋白算作一個蛋白，那么哺乳動物細(xì)胞含多達(dá)3~4萬個蛋白。當(dāng)計(jì)算各個修飾后的蛋白時，蛋白質(zhì)的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了10萬。細(xì)胞內(nèi)不同蛋白質(zhì)的豐度或濃度可能因不同的數(shù)量級而變化。細(xì)胞系統(tǒng)的任何變化，如老化、患病或接受藥物治療等均會導(dǎo)致一個或多個蛋白質(zhì)相對豐度或表達(dá)發(fā)生變化。蛋白質(zhì)組學(xué)旨在鑒定細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)的蛋白質(zhì)，并識別和監(jiān)測蛋白質(zhì)的變化，如對蛋白質(zhì)的修

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南十

    蛋白質(zhì)純化RP-HPLC是一種有效的蛋白質(zhì)/多肽純化工具。通過RP-HPLC法可以從雜質(zhì)中分離目標(biāo)蛋白/多肽，采集到的片段可用于進(jìn)一步研究，以及借助正交分析技術(shù)的分析，甚至可作為治療藥物。在蛋白質(zhì)/多肽分析過程中，色譜條件優(yōu)化的目標(biāo)是優(yōu)化分辨率和保留時間。制備色譜法分離蛋白質(zhì)/多肽時，色譜條件的開發(fā)主要是三個參數(shù)的優(yōu)化（參見圖45）：產(chǎn)量是從色譜法每一步中得到的純化的目標(biāo)蛋白/多肽含量。高產(chǎn)量可提高純化過程的實(shí)用性，并降低成本。純度是從目標(biāo)產(chǎn)物中去除雜質(zhì)的程度。純度高有助于從后續(xù)分析中獲得更佳的

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南九

    二硫鍵測定蛋白質(zhì)依靠正確的二硫鍵鍵合維持其三級結(jié)構(gòu)和生物活性。如果二硫鍵被還原或交換，則蛋白質(zhì)會失去天然三級結(jié)構(gòu)和生物活性。HPLC保留值取決于蛋白質(zhì)“疏水腳”的大?。▓D41），它會受到三級結(jié)構(gòu)的影響。二硫鍵的改變通常會使“疏水腳”增大，從而使蛋白質(zhì)在反相HPLC中的保留值增大。圖42中，天然白細(xì)胞介素II的出峰遠(yuǎn)遠(yuǎn)早于被還原的白細(xì)胞介素II，這是由于當(dāng)二硫鍵被還原時，蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。圖41.蛋白質(zhì)保留值取決于“疏水腳”的大小。被還原的二硫鍵會使蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生部分變性，這將增大“疏水腳

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南八

    脫酰胺作用-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南蛋白質(zhì)在高溫或高pH值下會降解。在脅迫條件下，有可能發(fā)生的化學(xué)降解是酰胺側(cè)鏈上的天冬酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼峄虍愄於彼幔▓D37)。天冬酰胺脫去酰氨基時，許多蛋白都會失去生物活性，但也有部分蛋白的生物活性不受影響。即使脫酰胺作用不造成生物活性的減弱，脫酰胺作用也是蛋白接觸不利條件的指示。特定天冬酰胺殘基脫酰胺的可能性取決于其在蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)中的位置。只有那些與溶劑接觸表面接近的天冬酰胺殘基才會發(fā)生脫酰胺作用。相鄰的氨基酸殘基同樣影響脫酰胺作用的可能性。

  • 迷你電泳儀的電源裝置設(shè)計(jì)*

    迷你電泳儀采用內(nèi)置直流電源，可直接使用AC100~110V或AC200~240V(隨機(jī)配備電源變壓器)。蓋子和移膠板均為PC塑料，耐腐蝕，強(qiáng)度高；鉑金電極，使用壽命長。整個儀器體積小、重量輕，攜帶方便，操作簡便。迷你電泳儀廣泛應(yīng)用于生化領(lǐng)域，適合教學(xué)、科研、食品、醫(yī)療等行業(yè)。水平電泳主要用來進(jìn)行核酸的分離和檢測，是分子生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)方法之一。迷你電泳儀的電源裝置設(shè)計(jì)*――直接插插入電泳槽，無需連線。安全的蓋子設(shè)計(jì)在電源的傍邊。當(dāng)蓋子打開時，會自動切斷電源，因?yàn)殡娫床糠钟泄饷粼?。迷你電?/div>

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南七

    蛋白質(zhì)氧化-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南在氧化環(huán)境條件下，盡管蛋白質(zhì)的幾個氨基酸都可能受影響，但有可能被氧化的氨基酸是甲硫氨酸；甲硫氨酸可被氧化成甲硫氨酸亞砜（圖34）。對甲硫氨酸殘基的氧化取決于其在蛋白質(zhì)中的位置。埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部的甲硫氨酸不可能被氧化。接近表面且與溶劑接觸的甲硫氨酸側(cè)鏈有可能被氧化。氧化條件包括熱、過渡金屬的存在以及溶液中氧氣的存在。同脫酰胺作用一樣，甲硫氨酸的氧化可能導(dǎo)致生物活性的喪失或減弱，或者，在一些情況下對生物活性無影響。這取決于甲硫氨酸在蛋白質(zhì)中的位置。但

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南六

    肽圖分析法-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南反相液相色譜已成為蛋白質(zhì)分析和表征的標(biāo)準(zhǔn)方法，尤其是治療性藥物的分析和表征。反相色譜分析法分辨率高，檢測靈敏度好，能夠提供大量關(guān)于蛋白質(zhì)的信息。有些時候，蛋白質(zhì)作為完整的分子分析，但更多的時候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸殘基將碳骨架斷開，從而將蛋白質(zhì)裂解成小片段。隨后用反相液相色譜法對裂解產(chǎn)生的肽段進(jìn)行分析。該技術(shù)叫作肽圖分析，是一種標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)分析方法。通過反相色譜分析蛋白質(zhì)裂解后的肽段能夠獲得蛋白質(zhì)的大量信息。通過比較表達(dá)蛋白與參照標(biāo)準(zhǔn)蛋

  • 蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南五

    反相液相色譜和質(zhì)譜（MS）的聯(lián)用為蛋白質(zhì)/多肽分析提供了強(qiáng)大的工具。20世紀(jì)80年代，約翰·貝內(nèi)特·芬恩和他的同事們開發(fā)了電噴霧離子源，使質(zhì)譜與反相液相色譜得以聯(lián)用。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的好處包括：質(zhì)譜是非常靈敏的檢測技術(shù)。質(zhì)譜可以提供所分離多肽/蛋白質(zhì)的分子量。質(zhì)譜可利用分子量特異性檢測蛋白質(zhì)。片段信息有助于確認(rèn)多肽。質(zhì)譜基于電荷和質(zhì)量進(jìn)行分離和測定，因此，與基于疏水性分離的反相色譜“正交”。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用廣泛用于肽圖的分析，提供了一種正交檢測肽法（參考文獻(xiàn)15）。如圖26所示，總離子質(zhì)
35363738394041共64頁，508條記錄 跳轉(zhuǎn)

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