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適合方法開(kāi)發(fā)的強(qiáng)大的ACE色譜柱組合用柱特點(diǎn)介紹
適合化學(xué)小分子方法開(kāi)發(fā)的ACE色譜柱組合特點(diǎn)介紹固定相名稱特點(diǎn)適用的化合物反相色譜柱,根據(jù)特點(diǎn)解決非極性性化合物ACEEXCELC18純經(jīng)典疏水C18,單一的疏水選擇性廣泛的有機(jī)化合物ACEEXCELC18-ARC18結(jié)合苯基,相當(dāng)于同時(shí)具備C18,苯基,親水AQ柱的選擇性,*水穩(wěn)定,與單一的苯基柱相比,在MS下的流失極小等同于C18,特別適合方法開(kāi)發(fā)疏水化合物,小至中等極性化合物,芳香性化合物ACEEXCELC18-PFPC18結(jié)合五氟苯基,相當(dāng)于同時(shí)具備C18,五氟苯基,親水AQ柱,及構(gòu)型的 -
ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅵ - HILIC應(yīng)用實(shí)例
ACEHILIC法開(kāi)發(fā)平臺(tái)和工作實(shí)例圖17顯示了HILIC方法開(kāi)發(fā)的流程圖。一般方法是:收集分析物相關(guān)的信息(如果已知的話),針對(duì)三個(gè)ACEHILIC相(用三款不同的ACEHILIC色譜柱在不同的pH洗脫液條件下)執(zhí)行梯度或等度HILIC篩選實(shí)驗(yàn)(取決于樣本分析物的親水性范圍),然后再優(yōu)化色譜法以達(dá)到可接受的HILIC法。表1中列出了ACEHILIC篩選條件。這些設(shè)計(jì)旨在探索廣泛的選擇性范圍,以及為達(dá)到所需分離提供一個(gè)良好的起點(diǎn)。圖17ACEHILIC方法開(kāi)發(fā)流程圖表1ACEHILIC篩選實(shí)驗(yàn)的 -
垂直電泳系統(tǒng)由電泳槽和三個(gè)功能模塊組成,每個(gè)模塊都自帶電極,電泳槽一體成型設(shè)計(jì)。系統(tǒng)采用底座配合帶膠條玻璃配合制膠,簡(jiǎn)單方便,有效防止漏膠。轉(zhuǎn)印時(shí),操作類似于“三明治”的操作方式,一小時(shí)內(nèi)即可完成轉(zhuǎn)印。毛細(xì)管電泳模塊帶有密封圈,方便毛細(xì)管的插入和取出,至多可容納10個(gè)毛細(xì)管。垂直電泳系統(tǒng)主要用于大尺寸的垂直凝膠電泳試驗(yàn)。該垂直凝膠系統(tǒng)具有多樣性的選配模塊,配備相應(yīng)的等電聚焦毛細(xì)管凝膠模塊和電轉(zhuǎn)印模塊,可以在該系統(tǒng)中進(jìn)行雙向電泳或轉(zhuǎn)印操作。垂直電泳系統(tǒng)可以應(yīng)用于PAGE,轉(zhuǎn)印和雙向電泳(2D),使
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ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅴ - HILIC法平衡要點(diǎn)
HILIC法平衡時(shí)間在RPLC模式下,可再現(xiàn)保留所需的典型柱平衡約為10倍柱體積。圖14中可清楚反映這一點(diǎn)但是,對(duì)于HILIC分離則不同。通常,HILIC色譜柱的平衡時(shí)間比RPLC色譜柱的更長(zhǎng)。這是該技術(shù)的一個(gè)特點(diǎn),也是可再現(xiàn)保留所必需的。在固定相粒子周圍建立和形成穩(wěn)定的水合層對(duì)可再現(xiàn)HILIC色譜法很重要(HILIC色譜法的重現(xiàn)性至關(guān)重要)。所花費(fèi)的時(shí)間也因相位(固定相)特性、洗脫劑和分析物而各有不同,因此取決于具體應(yīng)用。下面的指導(dǎo)原則可用作近似法(近似的參考)。重要的是:在HILIC方法開(kāi)發(fā) -
ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅳ - HILIC儀器兼容性
ACEHILIC色譜柱檢測(cè)器兼容性HILIC是一種能很好兼容眾多主流檢測(cè)器的技術(shù)。因此,檢測(cè)的(檢測(cè)器的)選擇受檢測(cè)器可用性、所需的檢測(cè)限制和分析物的理化特性(即:具有發(fā)色團(tuán)或電荷)等綜合因素的影響。UV-Vis檢測(cè)器UV-Vis檢測(cè)器是分析試驗(yàn)室中常見(jiàn)的檢測(cè)器之一。根據(jù)儀器的不同,一次可記錄多個(gè)波長(zhǎng),以優(yōu)化分析物覆蓋范圍。有時(shí),混合物中的分析物可通過(guò)參考紫外光譜庫(kù)來(lái)快速識(shí)別。圖10中的例子示出了五種β受體阻滯劑的分離,這些阻滯劑可通過(guò)他們不同的圖譜清楚識(shí)別(識(shí)別清楚)。圖10五種β受體阻滯劑的 -
ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅲ - HILIC法色譜條件
HILIC流動(dòng)相HILIC模式中用作流動(dòng)相的溶劑類似于RPLC模式下所用的溶劑。流動(dòng)相條件是各種HILIC保留機(jī)制的關(guān)鍵因素。通過(guò)改變洗脫液中有機(jī)組分和水組分的比例,可以改變分析的保留率。在HILIC模式下,保留因子建議保持在1.5-10之間。有機(jī)改性劑HILIC中常用的有機(jī)改性劑是非質(zhì)子溶劑乙腈。乙腈作為較弱的洗脫溶劑與水結(jié)合使用(見(jiàn)圖5)。與RPLC不同,增加流動(dòng)相中的有機(jī)物含量百分比,可增大分析物的保留率。乙腈具有粘度(粘度低)和紫外線切斷(截止波長(zhǎng))較低等優(yōu)點(diǎn)。由于能夠干擾固定相周圍的水 -
ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅱ - HILIC的分離機(jī)制
HILIC分離機(jī)制HILIC是一種復(fù)雜的分離技術(shù),通過(guò)多種相互作用模式來(lái)實(shí)現(xiàn)保留。這些相互作用的權(quán)重(中哪種是主要作用)是基于固定相、流動(dòng)相和分析物的理化特性。為了得到可靠和穩(wěn)健的HILIC方法,了解潛在的不同相互作用(了解可能存在的不同相互作用)是很有幫助的。這樣可以為待進(jìn)行的方法開(kāi)發(fā)合理選擇色譜柱和條件。(這樣可以為方法開(kāi)發(fā)的色譜柱和條件做出合理的選擇)HILIC中的流動(dòng)相通常包含大量的乙腈(70%)以及至少3%的水。水性組分使得極性固定相周圍存在親水環(huán)境,并且形成吸附水層以便分析物分散(分 -
ACE HILIC色譜柱方法開(kāi)發(fā)指南Ⅰ - HILIC的優(yōu)劣勢(shì)剖析
引言親水作用色譜(HILIC)采用與反相液相色譜(RPLC)類似的洗脫液,為親水性或極性到(至)極性很強(qiáng)的分析物提供了適宜的保留和分離替代方法(適宜的保留和分離提供了替代方法)。RPLC的特征在于保留較少或無(wú)保留,所以這類親水性分析物(logP值約為零或更小的那類分析物)的保留是一種挑戰(zhàn)(這些親水性的分析物(logP值約為零或更小的那類分析物)的保留對(duì)于RPLC是一個(gè)挑戰(zhàn),因?yàn)橛梅聪嗌V方法這些分析物只具有很少的保留或者沒(méi)有保留)。ACEHILIC色譜柱為親水性分析物提供了RPLC的替代選擇,無(wú)