Cas12a檢測系統(tǒng)用DNA熒光淬滅標(biāo)記熒光探針 返回列表頁

Cas12a檢測系統(tǒng)用DNA熒光淬滅標(biāo)記熒光探針上?；菡\生物現(xiàn)貨供應(yīng)

CRISPR_Cas核酸酶主要包括兩類：一類是RNA引導(dǎo)下可以切割RNA鏈的Cas13a和Cas13b；另一類是RNA引導(dǎo)下可以切割DNA鏈的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一個共同特點，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，還可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的這種附加切割能力比Cas12a要強。Cas12a的靶基因是ssDNA和dsDNA，并且Cas12a引導(dǎo)鏈需要識別PAM序列（Cas12a的PAM序列為TTTV）。

Cas12a酶的附加DNA酶切功能，可以切割特定單鏈DNA探針（熒光和淬滅標(biāo)記），使用5'端帶有熒光物質(zhì)（如：FAM等)，3'端帶有淬滅物質(zhì)（如:BHQ1等）的雙標(biāo)記熒光探針進行熒光檢測的方法。當(dāng)探針完整時，5'端的熒光物質(zhì)受到3'端的淬滅物質(zhì)的制約，不能發(fā)出熒光。而當(dāng)雙標(biāo)記熒光探針被分解后，5'端的熒光物質(zhì)便會游離出來，發(fā)出熒光，實現(xiàn)核酸檢測。RPA擴增的雙鏈DNA，在crRNA的引導(dǎo)下Cas12a可以切割雙鏈模板DNA和熒光標(biāo)記探針，探針被水解后釋放出熒光信號，通過檢測熒光信號便可知道是否有DNA模板。

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