Cas13a檢測系統(tǒng)用RNA Biotin和FAM標(biāo)記探針 返回列表頁

Cas13a檢測系統(tǒng)用RNA Biotin和FAM標(biāo)記探針上?；菡\生物現(xiàn)貨供應(yīng)

CRISPR_Cas核酸酶主要包括兩類：一類是RNA引導(dǎo)下可以切割RNA鏈的Cas13a和Cas13b；另一類是RNA引導(dǎo)下可以切割DNA鏈的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一個共同特點，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，還可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的這種附加切割能力比Cas12a要強(qiáng)。

Cas13a與Cas9最大的區(qū)別在于Cas13a結(jié)合并切割RNA，而Cas9切割DNA。從結(jié)構(gòu)上來看，Cas13a含有兩個HEPN結(jié)構(gòu)域，而Cas9用HNH和RuvC結(jié)構(gòu)域來切割DNA目標(biāo)。HEPN結(jié)構(gòu)域?qū)as13a切割RNA目標(biāo)是必需的。另外，與Cas9類似，Cas13a分子中關(guān)鍵殘基的突變可以形成核酸酶活性缺失的Cas13a（dCas13a），它能夠結(jié)合RNA目標(biāo)但無法切割。

Crispr Cas13a核酸酶（又名 C2c2）是依賴于RNA介導(dǎo)的RNA內(nèi)切核酸酶。在靶標(biāo)單鏈 RNA 存在 PFS序 列的情況下，可特異地切割靶標(biāo) RNA。此外，Cas13a還具有依賴于靶標(biāo)單鏈RNA的反式切割活性 （即，旁路切割活性），可用于開發(fā)靶標(biāo)核酸的快速檢測試劑盒。例如，MIT 的張鋒團(tuán)隊便利用Cas13a 蛋白開發(fā)了名為“SHERLOCK"的下一代分子診斷系統(tǒng)。SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白識別靶標(biāo)RNA并反式切割 RNA報告探針。

RNA標(biāo)記是將標(biāo)記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標(biāo)記物，進(jìn)而實現(xiàn)對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標(biāo)記在分子探針領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。用生物(空格)素標(biāo)記RNA的方法常見的是用生物(空格)素與UTP結(jié)合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP為底物通過RNA聚合酶SP6、T7等經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)記RNA。FAM是常用的熒光基團(tuán)，連接在Taqman探針的5’末端。

Cas13a檢測系統(tǒng)用RNA Biotin和FAM標(biāo)記探針上?；菡\生物現(xiàn)貨供應(yīng)。

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