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Cas13a檢測系統(tǒng)用RNA熒光淬滅熒光標記探針上海惠誠生物現(xiàn)貨供應(yīng)

CRISPR_Cas核酸酶主要包括兩類：一類是RNA引導(dǎo)下可以切割RNA鏈的Cas13a和Cas13b；另一類是RNA引導(dǎo)下可以切割DNA鏈的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一個共同特點，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，還可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的這種附加切割能力比Cas12a要強。

Cas13a與Cas9最大的區(qū)別在于Cas13a結(jié)合并切割RNA，而Cas9切割DNA。從結(jié)構(gòu)上來看，Cas13a含有兩個HEPN結(jié)構(gòu)域，而Cas9用HNH和RuvC結(jié)構(gòu)域來切割DNA目標。HEPN結(jié)構(gòu)域?qū)as13a切割RNA目標是必需的。另外，與Cas9類似，Cas13a分子中關(guān)鍵殘基的突變可以形成核酸酶活性缺失的Cas13a（dCas13a），它能夠結(jié)合RNA目標但無法切割。

Crispr Cas13a核酸酶（又名 C2c2）是依賴于 RNA 介導(dǎo)的 RNA 內(nèi)切核酸酶。在靶標單鏈 RNA 存在 PFS序 列的情況下，可特異地切割靶標 RNA。此外，Cas13a 還具有依賴于靶標單鏈 RNA 的反式切割活性 （即，旁路切割活性），可用于開發(fā)靶標核酸的快速檢測試劑盒。例如，MIT 的張鋒團隊便利用 Cas13a 蛋白開發(fā)了名為“SHERLOCK"的下一代分子診斷系統(tǒng)。SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白識別靶標 RNA 并反式切割 RNA報告探 針。一般來說，雙標記熒光探針法是使用5'端帶有熒光物質(zhì)（如：FAM等)，3'端帶有淬滅物質(zhì)（如:BHQ1等）的雙標記熒光探針進行熒光檢測的方法。當探針完整時，5'端的熒光物質(zhì)受到3'端的淬滅物質(zhì)的制約，不能發(fā)出熒光。而當雙標記熒光探針被分解后，5'端的熒光物質(zhì)便會游離出來，發(fā)出熒光。

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