Cas14a檢測系統(tǒng)用DNA Biotin和FAM標(biāo)記探針 返回列表頁

Cas14a檢測系統(tǒng)用DNA Biotin和FAM標(biāo)記探針上?；菡\生物現(xiàn)貨供應(yīng)

Cas14a核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶，其在tracrRNA:crRNA（或sgRNA）的引導(dǎo)下，特異結(jié)合并切割靶標(biāo)ssDNA，且無需PAM位點。相比于其他的Cas蛋白，Cas14蛋白的分子量普遍較?。?00-700aa）；與Cas12類似，Cas14a也可以結(jié)合靶標(biāo)核酸并激活其ssDNA反式切割活性，從而被應(yīng)用于靶標(biāo)核酸的分子檢測；與Cas12不同的是，Cas14a只能結(jié)合ssDNA靶標(biāo)，因此經(jīng)過擴增富集的靶標(biāo)核酸需使用T7核酸外切酶進行處理，且其中一條擴增引物需要使用磷硫?；揎椧源_保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈，從而留下ssDNA靶標(biāo)鏈以用于Cas14a介導(dǎo)的分子檢測。

DNA探針的標(biāo)記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移法、隨機引物法、PCR標(biāo)記法等，能用于同位素和非同位素標(biāo)記。

DNA探針技術(shù)又稱分子雜交技術(shù)，是利用DNA分子的變性、復(fù)性以及堿基互補配對的高度精確性，對某一特異性DNA序列進行探查的新技術(shù)。DNA探針是利用同位素、生物(空格)素等標(biāo)記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個堿基。當(dāng)DNA探針與待測的非標(biāo)記單鏈DNA（或RNA）按堿基順序互補結(jié)合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標(biāo)記DNA-DNA（或標(biāo)記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結(jié)合的核苷酸溶解后用檢測系統(tǒng)（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應(yīng)結(jié)果。由于DNA分子堿基互補的精確性，單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現(xiàn)配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物(空格)素標(biāo)記探針，使雜交試驗同時具有高度的敏感性。

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