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怎么培養(yǎng)好的你細胞?2021/9/22
細胞培養(yǎng)是細胞和分子生物學的主要工具之一,提供研究細胞正常生理學和生物化學的優(yōu)秀模型系統(tǒng)(例如,代謝研究、衰老)、藥物和有毒化合物對細胞的影響,突變和致癌。它還用于藥物篩選和開發(fā),以及大規(guī)模生產(chǎn)生物化...
消除細胞聚團就是這么簡單!2021/9/22
當在生長培養(yǎng)基中進行單懸浮細胞培養(yǎng)時,樣本中出現(xiàn)細胞丟失的情況并不少見。當細胞破裂時,它們會釋放DNA和碎片,導致細胞聚集成大團塊,使其難以擴張。細胞聚團既可導致細胞凋亡,也可引起細胞死亡。隨著更多的...
清晰的條帶是這樣跑出來的——western blot八大秘訣!2021/9/17
1.制膠:先制分離膠,再制濃縮膠,嚴格按照制膠說明書來就可以了。需要注意的一點是制膠一定要混勻!混勻!混勻!個人經(jīng)驗是每加一種試劑,就混勻一下,直到最后一種試劑加完。對于初學者,還要區(qū)分制膠的玻璃板是...
如何在WB中順利獲取大分子蛋白?2021/9/17
分子量大于150Ka的蛋白,經(jīng)常折磨我們實驗人。想當初,辛辛苦苦忙到深夜,結果發(fā)現(xiàn)顯影空空如也。連續(xù)幾個月如此,內(nèi)心是何等抓狂。當大分子條帶第一次出來的時候,心里特別開心,就像見到了初戀情人一樣??吹?..
如何優(yōu)雅地獲得漂亮小分子蛋白條帶2021/9/17
做過Western-Blot的童鞋知道,分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做。小分子蛋白虐我千百遍,我待小分子蛋白如初戀。抱怨是沒用的,想方設法解決問題才是正道。一次又一次的調(diào)整方案,一次又一次的徒...
分享總結Western跑磷酸化蛋白的要點2021/9/17
抗體工欲善其事必先利其器,抗體很關鍵。這里我們要說的并不是最貴的就是好的,如果條件允許,建議同時購買不同廠家的抗體,一起來試一試,因為有時候即使是好的品牌,不同批次穩(wěn)定性也不一樣。抗體從訂購到到貨有一...
盤點RACE技術的幾種類型及特點2021/9/16
在分子生物學中,未知基因全長序列的獲取是研究新基因的重要步驟。當我們不清楚目的基因的完整序列時,獲得未知序列的方法有反向PCR、mRNA差異顯示技術、基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等等.......
搞定內(nèi)參,駕馭 Western blot 已成功一半2021/9/15
westernblot對絕大多數(shù)實驗新人而言,絕對是心中痛,一碰就要抓狂。沒辦法,誰讓導師發(fā)話了,WB做不好,延畢就是分分鐘的事兒。這還真是讓小伙伴們感嘆道,WB想說愛你不容易。那么為了*馴服WB,獲...
用磷酸化抗體做Western Blot時,要注意哪些?2021/9/15
今天給大家分享一下在用磷酸化抗體做WesternBlot時,應該注意些什么。1.警惕內(nèi)部敵人一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑,還要加入一定量的磷酸酶抑制劑,因為組織或細胞裂解時會釋放出...
Western blot實驗結果分析2021/9/15
Westernblot實驗結果分析①微笑條帶解析:由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致,多出現(xiàn)于較厚的凝膠處理辦法:配膠時一定要充分混勻,待其充分凝固后再做后續(xù)試驗②帶出現(xiàn)紋理現(xiàn)象解析:樣品不溶性顆粒處理...
WB的免疫印跡操作分享2021/9/14
①膜處理(甲醇1min,風干(放濾紙上),甲醇1min,水1min)②封閉(用TBST配5%牛奶)1h配搖床③加一抗,牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書,看膜的大小配多少一抗,4°過夜。④室溫孵育20m...
WB過程中最重要的環(huán)節(jié)——轉(zhuǎn)膜2021/9/14
①跑到溴酚藍距離最下緣25px時配電轉(zhuǎn)液(tris3.03g,甘氨酸14.4g,甲醇100ml,定容至1L)②在電轉(zhuǎn)液中剝膠,裁膠,剪膜,膜活化(甲醇1min,去離子水1min,電解液15min)③“...
WB電泳技巧分享2021/9/14
①清洗玻璃板,去離子水沖,風干或烤干(一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈,相當重要)②按說明書配膠。先配下膠(分離膠),一般兩塊板配10ml的10%的膠(20~80kDa通用)膠的濃度根據(jù)...
蛋白樣品的制備與定量2021/9/14
(1)提細胞蛋白①消化或刮下細胞至1.5的EP管中,標記,10000r離心2min,PBS洗3遍②吸去EP管中PBS,最好用濾紙吸干里面的水分,加適量RIPA裂解液(RIPA裂解液:蛋白酶抑制劑=25...
三天征服Chip的經(jīng)驗分享2021/9/13
在科研界,CHIP無疑是高冷的女神,在追逐的過程總是分分鐘虐得體無完膚,糟心的實驗結果更是分分鐘想去“狗帶”。征服CHIP的路上,有多虐心就有多少要注意的地方。慶幸的是,曾得到女神青睞的前輩們積累了不...

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