XSL0002 免疫細(xì)胞化學(xué)ICC

【星森林生物】免疫細(xì)胞化學(xué)是將免疫學(xué)基本原理與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起來(lái)的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。

免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的概述

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC(immunocytochemistry, ICC)——是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo) 記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來(lái)確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì))， 對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。

(一) 免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)抗原和抗體的要求

1）具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實(shí)驗(yàn)成功的首要條件。 – 對(duì)抗體的要求：純度高、比活性強(qiáng)；

2）高度特異性抗體的獲得，取決于抗原的純度。 – 對(duì)抗原的要求：純度高，免疫原性強(qiáng)，穩(wěn)定無(wú)變化。

(二) 免疫細(xì)胞化學(xué)抗原 (antigen, Ag) 1）抗原的概念：

凡是在機(jī)體內(nèi)引起體液免疫和(或)細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原?？乖哂袃蓚€(gè)方面的特性：

① 免疫原性：引起機(jī)體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細(xì)胞的特性；

② 免疫反應(yīng)性：抗原能與相應(yīng)的抗體及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。

3）根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為：

① wanquan抗原：分子量較大，一般在10kDa以上，并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。 – 免疫原性強(qiáng)的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之；脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免 疫原性。

② 半抗原：又稱為不wanquan抗原，分子量較小。例如：某些短肽、多糖、類脂和藥物等。 – 半抗原必需與載體結(jié)合，才能獲得免疫原性。 免疫細(xì)胞化學(xué)載體 通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì)，具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。 ① 常用的載體有鑰孔血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。

② 用戊.二.醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過(guò)功能基團(tuán)-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為 5kDa結(jié)合5～25個(gè)分子的小肽。

（三）抗體 (antibody, Ab)

1、抗體的概念：

① 機(jī)體受到抗原刺激后，由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。

② 抗體主要存在于血清內(nèi)；

③ 抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗體。

④ 免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既IgG、 IgD、IgE、 IgA、IgM。

2、免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體。

① 單克隆抗體：是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備的。 – 特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。

② 多克隆抗體：是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克 隆所產(chǎn)生的抗體混合物。 – 特異性低，會(huì)產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。 – 多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機(jī)會(huì)。 – 抗原與抗體的結(jié)合，要求量保持一定比例，當(dāng)抗原或抗體過(guò)量時(shí)，是不能聚合成大顆粒。

3、抗體的制備——多克隆抗體的制備

① 動(dòng)物的選擇

② 佐劑(adjuvant)

③ 免疫方法

④ 免疫劑量

⑤ 抗體效價(jià)的測(cè)定

⑥ 放血或定期抽血

選擇什么動(dòng)物來(lái)免疫取決于：

(1) 動(dòng)物的選擇

① 所需抗血清的量 – 小鼠只能提供1.0～1.5ml的血液，而山羊能提供幾升。

② 能供免疫用的抗原量 – 小鼠50mg足夠，而山羊需要幾毫克。

③ 動(dòng)物的品系：免疫動(dòng)物與提供抗原的動(dòng)物之間的種系差異越大越好。 – 例如哺乳動(dòng)物的抗原可選擇非哺乳動(dòng)物來(lái)制備抗體。 – 常用的動(dòng)物有兔、羊、馬、豬等，以兔(新西蘭兔，年輕，健壯，體重在2.5kg左右，雄性)。

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：

歡迎咨詢?cè)斦?，我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容！

做實(shí)驗(yàn)，找星森林！您的科研生涯，我們一路相伴！

【平臺(tái)項(xiàng)目開(kāi)展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)，芯片類實(shí)驗(yàn)，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請(qǐng)指導(dǎo)等服務(wù)。

【星森林生物】已開(kāi)展了數(shù)千個(gè)實(shí)驗(yàn)外包項(xiàng)目。我們專注于醫(yī)學(xué)課題研究，已從課題申請(qǐng)、方案設(shè)計(jì)、試劑采購(gòu)、模型構(gòu)造、 標(biāo)本檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析，各個(gè)環(huán)節(jié)積累了數(shù)千個(gè)成功案例經(jīng)驗(yàn)，為數(shù)千個(gè)來(lái)自臨床的科研工作者解決了大量的科研問(wèn)題。更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息請(qǐng)咨詢星森林生物。