XSL0010 石蠟冰凍切片免疫組化

石蠟冰凍切片免疫組化

免疫組化

應(yīng)用免疫學(xué)基本原理，通過標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）對組織內(nèi)抗原（或抗體）的分別進行組織和細胞原位檢測，從而進行定位、定性及相對定量的研究。

實驗意義

1. 免疫組織化學(xué)可應(yīng)用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。

2. 可與組織化學(xué)染色方法的形態(tài)學(xué)診斷相結(jié)合，提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準(zhǔn)確率，并為腫瘤進行進一步的病理分型。

3. 指導(dǎo)和提供臨床治療方案的選擇。

實驗步驟

1. 石蠟切片免疫組化：

①67℃烘箱烘片2小時，常規(guī)脫蠟至水，用pH 7.4的PBS沖洗三次，每次3 min； ②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min，蒸餾水沖洗三次，PBS沖洗三次，每次3 min；

③3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗三次，每次3 min；

④5~10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10 min，吸去血清后滴加稀釋至適當(dāng)比例的一抗，37℃孵育1-2 h或者 4℃孵育過夜；

⑤PBS沖洗三次，每次3 min；⑤滴加稀釋至適當(dāng)比例的帶標(biāo)記二抗，37℃孵育10~30 min，PBS沖洗三次，每次3 min；

⑥滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記物工作液，37℃孵育10~30 min，PBS沖洗三次，每次3 min；

⑦顯色劑顯色，自來水充分沖洗，復(fù)染細胞核，酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2. 冰凍切片免疫組化：

①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內(nèi)切片，厚度為5~6 μm；

②載玻片可不打底，裱片后立刻用電吹風(fēng)吹干；

③染色前需用冷丙.酮4℃固定10~20 min；

④PBS洗2次，每次5 min；

⑤3%H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶20 min，需避光處理；

⑥后續(xù)血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似，最后脫水透明封片進行觀察。

結(jié)果展示：

石蠟切片免疫組化

冰凍切片免疫組化

實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 實驗周期：1-2周

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器等）

需確認的信息

1. 是做石蠟切片還是冰凍切片（推薦做石蠟切片）

2. 樣本的種屬和類型，是組織還是細胞？

3. 樣本的數(shù)量

4. 是否提供一抗，我方可代購

5. 半定量分析要求

6. 拍照要求

石蠟冰凍切片免疫組化

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